NS1蛋白42位氨基酸的改变对H5N1亚型禽流感病毒致病性影响研究.pdf

摘要 本研究选择1株分离于中国大陆的H5Nl亚型高致病性禽流感毒株 染性试验，判定禽流感病毒Nsl蛋白42位氦基酸改变是否影响DK27对小鼠的致病性。 我们首先对DK27的病毒基因组进行克隆测序，将所得8条RNA片段分别克隆PBD载体构建 成转染质粒并共转染293T细胞，利用反向遗传技术成功拯救出重组亲本病毒m)K27。通过比较DK27 和lu)K27对小鼠的致病性试验结果发现：小鼠经l晚m∞病毒鼻腔接种感染后体重下降明显，且 在感染后7天100％致死，两株病毒均表现为明显的高致病性，拯救的重组亲本病毒毒力没有发生变 化。 为了验证H5N1皿型禽流感病毒NSl蛋白42位氨基酸改变对病毒致病性的影响，我们对Ns基 因进行定点突变使Nsl蛋自42位丝基酸改变为甘氨酸，Nsl突变基弱经序列判定无误克隆PBD载 体构建转染质粒，和其它7个IⅢA基因的转染质粒共转染293T细胞，利_}lj反向遗传技术拯救出重 经鼻腔接种感染小鼠后4、6天在肺脏中一直保持较高的含量，达107”EID50以上；脑中含量次之， 但随时间的增加逐渐升高；肾脏、脾脏虽可分离到病毒，但含量均不高，小鼠经106EⅡb病毒鼻腔 接种感染后体重下降明显，且在感染后7天loo％致死。由此判定重组突变病毒均可通过呼吸系统侵 入其他组织器官，并突破血脑屏障侵入大脑组织，最终引起小鼠死亡，对小鼠仍然表现为高致病力。 与lu)K27对小鼠的致病性比较发现，拯救的重组突变病毒对小鼠的致病性没有发生明显变化。由此 发生改变． 关键词：H5N1亚型禽流感病毒，反向遗传技术，Nsl蛋白，致病性 Ⅱ Abstract hl the Wc a H5Nl Avi锄I棚u％盟vi蛸 snJdy， targeted HigllIyPatIlogenic NS 42 meNSl orderto at of lnve 删衄t曲g gene．IrI ilIvcstiga把whetllerme枷ino粒idposi石on proteill s鲫e砌uences叫Ⅱ他“埘l朗ceof枷uefl∞A、，inIs．Ⅱ圮rccombif啪ted“msRDK27NSlS42Gwe rescued fbmn锄siIlfectcd293Tcells inocul砷ed success缸lly byfeVe雠gene6cssys泐n，锄dint瑚n船ally SPFBAUB／Cmice． alld inPBD F豳tly，DK27ts cl伽cd vcctor recornbinanted cightg髓eswe圮鸵quenced s印arately．The VinIsRDl(27 293Tcells w啦姗c懈fhlly地sc砒d劬m仃al培infectedby托versegene矗cs哪t唧． me∞sul协of inoctIhtedsPFBALB／CIIIicc DK27札d Comparjng Inlmn硒ally expc咖啪t谢tll RDK27， wefo帅d吐mttheIllice alldi酣af|er8 vimscshadevid锄t l埘”si鲥ficamIo嚣，柚d days，two weight micetnereWasa1Sono di彘崩1ce