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离子束辐照诱变 细菌纤维素生产菌株研究 陕 西 科 技 大 学 学 生：刘东文 指导老师：张 雯 专 业：制药工程 学 号：201004040207 毕业答辩 研究背景 细菌纤维素（Bacterial Cellulose, BC） BC的独特性质 BC生产菌株—木醋杆菌 离子束辐照诱变的优势 目的及意义 研究内容 离子束辐照诱变条件的确定 筛选体系的建立 菌株的诱变 突变菌株的筛选 突变菌株的遗传稳定性研究 突变菌株的材料学特性研究 壹 离子束辐照诱变条件的 确定 菌体细胞的收集 5mL种子液固体培养基平板上30℃静态培养24h 菌膜移取至装有10mL无菌水和玻璃珠的100mL三角瓶 振荡培养箱（200r/min，30℃）中振荡培养1h使菌体细胞充分混匀 菌膜移取至装有10mL无菌水和玻璃珠的100mL三角瓶 离子束辐照诱变条件的确定 “1”代表只抽真空的菌株的固体培养基平板； “7”代表离子注入剂量为32×1014 N+/cm2 的菌株的固体培养基平板； “9”代表离子注入剂量为47×1014 N+/cm2的菌株的固体培养基平板； “11”代表离子注入剂量为67×1014 N+/cm2的菌株的固体培养基平板； “12”代表离子注入剂量为70×1014 N+/cm2的菌株的固体培养基平板。 离子束辐照诱变条件的确定 选择41×1014 N+ /cm2 的剂量进行辐照诱变。 贰 固体培养基平板-96孔 板-试管筛选体系的建立 筛选体系的建立 根据观察固体培养基平板上的菌落特征来进行固体培养基平板初筛 ； 所以选用96孔板进行初次复筛； 为了得到更准确的结果，要对菌株产品进行检测，所以用试管进行二次复筛。 叁 菌株的诱变 菌株的诱变 操作台 真空室 真空泵 肆 突变菌株的筛选 突变菌株的筛选 固体培养基平板初筛 96孔板复筛 试管复筛 固体培养基平板初筛 固体培养基平板初筛 将固体培养基平板上菌落筛入96孔板。第1列是对照菌株，第2、3、4、5、6、7列是选取颜色较为发白且菌落生长迅速的菌落，第8、9、10、11、12列是选取表面水润光滑的菌落。 96孔板复筛 96孔板复筛 因为细菌纤维素膜是木醋杆菌的初级代谢产物，所以根据膜的生长快慢及膜的基本形态可以做出筛选。根据所建立的固体培养基平板-96孔板-试管筛选体系，得到96孔板初次复筛所选出的50株菌株为：2G、3D、4F、6C、8D、5E、1B、6A、4E、11G、7H、3A、6G、5A、11E、10B、2D、2E、5D、10A、8G、1E、5G、6D、9B、7B、11C、8B、10G、10C、6F、3G、1G、4A、5F、8E、3E、6E、11F、8F、9A、5C、3H、11D、9H、4B、2C、2B、1D、7A. 试管复筛 从左到右四张图片依次代表“菌株4E”、“菌株5E”、“菌株11E”和“菌株2G”试管复筛时的BC膜生长状态，试管后面试管架上为其余菌株试样。 试管复筛 以产量为先决筛选条件，选取2D、2E、3D、4E、5A、5D、5E、5G、11E作为优良变异菌株，以1B、1G作为对照菌株。 试管复筛 2D产量提高303.3%，持水率提高8.37%，2E产量提高201.1%，持水率提高7.9%，3D产量提高125.4%，持水率提高12.2%，4E产量提高138.1%，持水率提高10.42%，5A产量提高87.3%，持水率提高8.89%，5D产量提高334.9%，持水率提高7.59%，5E产量提高141.2%，持水率提高10.6%，5G产量提高306%，持水率提高4.87%，11E产量提高112.7%，持水率提高8.61%。 伍 突变菌株的遗传 稳定性研究 突变菌株的遗传稳定性研究 -11.03% 79.71% -2.44% 92.50% 213.53% 3.220 11E 0.12% 89.70% 0.80% 95.57% 76.57% 1.813 5G -5.16% 84.97% -1.89% 93.02% 190.81% 2.987 5E 0.06% 89.64% 1.13% 95.88% 238.20% 3.473 5D -4.29% 85.75% -1.89% 93.02% 189.52% 2.973 5A -5.39% 84.76% -0.19% 94.63% 88.90% 1.940 4E -5.88% 84.32% 1.42% 96.16% 57.74% 1.620 3D -7.40% 82.96% 0.46% 95.25% 116.81% 2.227 2E -11.35% 79.42% -0.25% 94.58% 61.64% 1.660 2D -0.40% 89.23% 0.33%