马氏珠母贝抗菌蛋白的分离和活性的研究.pdfVIP

摘要 马氏珠母贝具有很强的抗病能力，对其抗菌蛋白的类型、活性以及抑菌作用尚未见 系统的研究报道。本文采用冰醋酸提取法分离获得了抗菌蛋白，并对所分离的抗菌蛋白 的理化性质和抑菌活性进行了分析。 1．马氏珠母贝抗菌成分的分离纯化 取马氏珠母贝(砌c纽如^亿腕幡豇)的鳃，匀浆后取上清液。利用DEAESephadex A-50和SephadexG．75，对匀浆物进行分离纯化。 A．50阴离子交换层析，共得到五个组分峰，第1、lI峰为穿透 经D础也sephadeX 峰，Ⅲ．V峰为洗脱峰，经抗菌活性粗筛，洗脱峰第V峰(收集管74．81)抗菌活性较强， G-75凝胶过滤层析分离，共得到两个组 收集该组分峰。将该组分峰进一步用S印hadex 000 电泳图谱显示为单一的蛋白质条带，分子量约30 Da，将其命名为PM舢。 2．马氏珠母贝抗菌成分的抗菌活性研究 用纸片琼脂扩散法测定了马氏珠母贝鳃的匀浆物的抗菌活性。测试菌株包括革兰氏 阴性菌，大肠埃希氏菌(西幽P，瑚缸∞切、绿脓杆菌∞P谢b小D嬲韶哪l伽)、嗜水气 删绷06碱c搬)，和革兰氏阳性菌，金黄色葡萄球菌@印，砂fD∞cc淞口姗邮)、枯草芽胞 杆菌仍口c讲淞s砌凰)。实验结果显示，当样品浓度为OD2∞=1．3时，对革兰氏阴性菌 除副溶血弧茵的抑菌圈直径达铀吼外，对其它各菌抑菌圈直径达均llmm以上。对革 兰氏阳性菌，金黄葡萄球菌的抑菌圈直径达10n[蛐，但对枯草芽胞杆菌无抑制作用。利 用微量稀释法测定纯化的PM．AMP对以上各菌的抑菌活性。实验结果表明，PM一伽 具有广谱抗茵活性，对革兰氏阴性菌和阳性菌均有明显的抗菌作用，但对枯草芽胞杆菌 无抑制。 用微量稀释法分别测定了纯化的抗菌肽最低抑菌浓度MIC(Ilmol／L)，抗菌肽对四 种标准菌株大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、嗜水汽单胞菌、金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌的 血实验结果显示，PM．黼具有较弱的溶解鱼红细胞的作用，具有一定的应用前景。 关键词： 马氏珠母贝；蛋白；分离纯化；抗菌活性 ABSTRACT not 1．0Ⅶd， A砒胁m哪豇h笛s仃0nga而vil锄abili够ne删db硼dyn锄妇had 锄dthe锄tibact谢almcc：hallisl璐ofa而bact甜al had this p印tidesdiSput酣．Inpap％acetic t0 acid啄蛔硝0nmetIlodh勰b咖璐cd gct删bact酣al州ein．Ph蜘c0ch锄icaJ阳)peni骼 of 缸d砌acterial如缸vityPj眦dh肘a，蛔帖豇西llwe∞also锄alyzed． of锄曲砌甜al 1．Sep锄tion锄dp谢fication p印tid懿舶m胁如^彻，fe邶豇 of were and t0 A刀c尬d臼朋a，圮船订百nshoInogenizedcentri如gatcd The电b蚰嚣powder di伍：rent DEAE g烈跚p锄at锄t，缸ld pI岫c0啪ponentswere粤．aduaUys印aratedbyusiIlg and fil昀tion Sephad懿A-50Sephad懿G-75gd sequ钮ccly．