奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌凝聚因子A+A区基因的克隆表达.pdfVIP

摘 要 乳腺炎是奶牛的一种常见病和多发病，其发生的主要原因是病原微生物感染。引 起乳腺炎的病原微生物多达80多种，主要包括细菌、霉形体、真菌及病毒。细菌性 病原微生物中，金黄色葡萄球菌占主要地位，但多年来对金黄色葡萄球菌性乳腺炎的 防治一直没有有效的措施，本文拟对金黄色葡萄球菌凝聚因子AA区基因进行克隆表 达，为研制预防金黄色葡萄球菌性乳腺炎生物工程疫苗提供基础。 A区序列设计引物，利用PCR 本试验根据GeneBank公开发表的NewMan株ClfA 方法对呼和浩特周边地区存在的4个主要的金黄色葡萄球菌基因型进行扩增，获得了 金黄色葡萄球菌的凝聚因子A(ClfA)A区基因。实验对四株不同基因型的金黄色葡 株ClfA 因3型、基因9型、基因1l型之间同源性也较高，而基因5型与另外三个基因型同 源性也较低。 株多一个抗原位点，因此选择了其中一个基因型即基因9型进行表达。将该片段定向 插入到原核表达载体pET-32a(+)中，获得了重组表达质粒pET-ClfA—Aregion。 目的蛋白以可溶形式存在。His·bind柱子纯化后获得纯度较高的C1fA—Aregion蛋 白。 纯化后的蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫家兔，经三次免疫后得到了较高效价的抗血清。 通过ELISA、试管凝集试验、抗体抗粘附能力检测、吞噬调理试验证明目的蛋白具有 黏附活性，自制高免血清具有抗金黄色葡萄球菌黏附至牛纤维蛋白原的作用以及吞噬 调理作用。实验证实所表达的蛋白为ClfA-Aregion蛋白。 关键词：奶牛乳腺炎；金黄色葡萄球菌：凝聚因子A(C1fA)；克隆；表达 and ofthe A of factor region CloningExpression geneclumping Aof aureusfromBovineMastitis Staphylococcus Abstract Mastitisisaconunonand diseaseinthe iscaused bovine，it fi,equently-occurring by aremorethan which microorganisms．Thereeightypathogenicmicroorganisms pathogenic in as cancausemastitis andviruses． nature，such aureusthemain inthe is therearenoeffective Staphylococcus pathogenbacterium，and measuresto mastitiscaused aureus．Sothe factorA prevent byStaphylococcus Clumping A wereclonedand inthisarticleto materiasfor regiongene expressed provide produceing vaccin