酵母菌转化香叶醇和橙花醇的机制的研究.pdfVIP

l ㈣洲川舢㈣㈣删ff『『删 l||。 Y1 73u m15IIIIl3JIIII3PlIII 119Il 摘 要 微生物生长引起食品变质事关国民生命安全和健康的大事。鉴于化学防腐剂 使用条件局限性、长期使用会产生生物抗药性和祟积性毒害等问题，凶此，在战 略上采用先合成目标产物的d订体，然后川微生物转化，这对人类减少刘。自然界依 赖，缓解生态平衡压力，具有重要意义。本项研究采用野生型酵母菌经紫外线诱 变筛选产生较高活性的目标酵母菌，将人工合成构成柠檬醛的两个顺反异构物的 自订体(即香叶醇和橙花醇)转化成具有抗菌性的醛、并初步总结…转化的机制和 条件，阐明其抑制黑曲霉的过程及机理。 1．筛选出高效转化目标产物的菌株：分离野生型酵母菌作为出发菌株，经紫外 线诱变后筛选出目标菌株，其后对目标产物转化率比对照组高3．06倍的目标菌株， 经转接25代后测定目标菌株具有很好的遗传稳定性，目标菌株与}{{发菌株的生长 曲线和对糖的利用情沙I!-虽基本接近(生长速率分别是0．359和O．321)，但对糖的优 先利用情况均足：麦芽糖蔗糖D一半乳糖木糖。 2．筛选实用的转化促进剂：香叶醇和橙花醇均无抗菌性，因此能进行酵母菌的 转化，在转化的条件选择上，以在液体培养基中添加NAD+，同时加入相应的醇接 种密封于28。C、100r／min摇床培养48h，其转化产物具有很好的抗菌性，而其他 方法均无抗菌性，高效液相色谱显示该方法的产物中有香Htl醛或橙花醛的I牧收峰。 3．目标产物抗菌效果监测：转化后的香叶醇和I橙花醇中含有抗菌性的醛，由于 醇无抗菌性，因此抗菌的主要物质是转化后的醛，无论是液体方法还是气体方法 橙花醇转化后的抗菌性强于香叶醇转化后的产物，而将两组以1：1的比例混合后 因醇的加入而导致抗菌性减弱：液体混入与气体扩散抗菌方法相比后者效果优于 自订者。 4．气体扩散抗菌的方法证实转化的目标产物与柠檬醛作用类似：转化后的醛 与柠檬醛一样能抑制细胞的氧化还原酶类，但程度有所差别，对于MDII酶来说， 以NADP’为辅酶时柠檬醛对照组比空白对照组降低了45．7％；橙花醛组比空白对照 组降低了27．6％：香11I‘醛组比空白对照组降低了9．7％；以NAD+为车f}|酶时柠檬醛 对照组比对照组降低了46．7％；橙花醛组比空白对照组降低了33．3％；香叶醛组 比空白对照组降低了14．8％。 目标产物组SDH平均比活介于空白对照组与1日柠檬醛对照组之问，柠檬醛对 照组SDIi平均比活比空白对照组降低了55．99％：橙佗醛组SDtl的平均比活比空 白对照组降低了35．63％；香叶醛组SDII的平均比活比空白刈‘照组降低了16．18 ％。 5．转化后的目标产物具有与天然产物相同的抑菌机制：①以琥珀酸为底物时 橙花醛组和香叶醛组线粒体呼吸速率分别为4．93％和5．58％；比空白对照组降低 酮戊二酸为底物时橙花醛组和香fl—f．醛组线粒体呼吸速率分别为4．81％和5．47％； @以丙酮酸为底物时橙花醛组和香叶醛组线粒体呼吸速率分别为5．00％和 5．86％；分别比对照组降低了30．94％和19．06％，与柠檬醛组相比分别提高了 l7．40％矛11 29．52％。而橙花醛组和香叶醛组Mt的呼吸速率是介于对照组和柠檬 醛组之问的， 综上所述，利用酵母菌的乙醇脱氢酶，以完整酵母菌活细胞j在添加NAD+的 条件下，能将香nt醇和橙花醇转化成香叶醛和橙花醛，具有显著的抗菌性，其抗 菌机理与天然柠檬醛类似。 关键词： 酵母菌 诱变香叶醇橙花醇