上海透析患者Fabry病酶筛查及突变α-gal分子构象的研究.pdfVIP

上海透析患者Fabry 病酶筛查及突变α-gal 分子构象研究 摘 要 Fabry 病是一种少见的、以 X 连锁方式遗传的溶酶体贮积病 （lysosomal storage diseases ，LSDs ），男性新生儿的发病率约为1/40000。 其发病机制是由于GLA 基因突变导致α-半乳糖苷酶A （α-gal A ）活性 缺失或下降，致使鞘糖脂代谢出现异常，在机体血管内皮细胞及肾脏、 心脏、皮肤、眼及神经系统等组织沉积，最终导致受累脏器的缺血性损 害。 本研究在已建立的外周血粒细胞α-gal A 活性检测基础之上，在国 内率先建立干燥血滴滤纸片（干血滤纸片）酶活性的检测方法并分别检 测16 例男性半合子、11 例女性杂合子和30 例正常对照，同时检测上述 被检测者的外周血粒细胞酶活性。男性半合子干血滤纸片和外周血粒细 -1 -1 -1 -1 胞α-gal A 酶活性值分别为0.1nmol·ml ·h (0-0.14 nmol·ml ·h )和0.46 nmol·h-1·mg-1 （0.21-0.85 nmol·h-1·mg-1 ），均不足正常值的 10%，易于与 正常人区分，干血滤纸片和外周血粒细胞酶活性检测对男性半合子特异 性和敏感度均为 100%，可作为筛检Fabry 病半合子的可靠手段。女性 杂合子干血滤纸片和外周血粒细胞酶活性检测各有7 例和5 例结果处于 临床正常值参考范围内，敏感度分别为 36.36%和 54.54% ，对于疑诊 Fabry 病的女性受检者必须通过基因检测才能确诊。外周血粒细胞酶活 性检测值较为准确，适用于家系调查、评估病情和判断预后，而干血滤 纸片酶活性检测具有准确、方便、快捷、经济，易于保存和运输等优点， 是Fabry 病筛查和远程诊断的重要手段。 本研究第二部分运用干血滤纸片酶活性检测方法在上海市 12 个透 析中心1544 例维持性血液透析患者中进行Fabry 病筛查，检出1 例经典 型男性半合子患者，在男性血液透析人群中检出率为0.125% ，与既往文 献报道的检出率一致。筛查118 例腹膜透析患者，检出1 例迟发型男性 半合子，在男性腹膜透析人群中检出率为1.72%。我们对这2 例先证者 的14 名家系成员进行家系筛查，共检出11 例患病家系成员。本研究提 高了Fabry 病尤其是迟发型的诊断率，丰富了Fabry 病家系库，并为病 人提供治疗方案和咨询，减少了疾病给家庭和社会带来的影响及隐患。 本研究第三部分对本学科既往所发现的 12 种错义突变类型进行 α-gal 分子构象模拟，分析突变对分子结构和临床表现的影响。在迟发型 患者中，α-gal 主、侧链受影响原子较少，而在经典型患者中，受影响原 子较多。活性位点突变患者酶活性低于隐蔽区域位点的突变，且与受影 响原子数无关，临床均表现为经典型；而隐蔽区域位点突变酶活性高于 活性位点突变，且其受影响原子数与患者残余酶活性及MSSI 评分存在 相关性。结合突变位置和受影响原子数可初步预测Fabry 病患者临床表 型和酶活性，有望今后应用于Fabry 病患者病情和预后的判断。 关键词： Fabry 病，α-半乳糖苷酶A ，干血滤纸片酶活性检测，筛查， 突变α-gal 分子构象 SCREENING FOR FABRY DISEASE AMONG SHANGHAI DIALYSIS PATIENTS AND STRUCTUAL STUDY ON MUTANT α-GALACTOSIDASES ABSTRACT Fabry disease is an X-linked lysosomal storage disease. The deficiency of lysosomal hydrolase α-galactosidase A (α-gal A) leads to accumulation of globotriaosylceramide in multiple organs including kidney,