水稻白叶枯病抗性基因Xa2的定位和克隆.pdfVIP

摘要 水稻是世界上最重要的粮食作物之一，由水稻黄单胞杆菌(Xanthomonasoryzae pv．Oryzae，Xoo)弓l起的水稻白叶枯病是水稻最严重的细菌性病害，生产实践表明控 制水稻白叶枯病最经济有效的措施是培育抗病品种。目前已经鉴定出约30个白叶 eta1． 白叶枯病抗性基因Xa2对日本茵系II具有专一抗性。在此之前，Yoshimura (1994)将Xa2初步定位于水稻第四染色体，与Xal连锁且有2．16％的重组交换率。 本研究的目的是将Xa2精细定位，并对定位区域内与抗性相关的候选基因进行遗传 和功能分析，主要结果如下： 1．构建包含1101个单株的IR24／IRBB2 F2 F2群体，包含2769个单株的ZZA／IRBB2 群体。利用ZZA／IRBB2 F2群体中136个单株组成的随机群体，构建Xa2区域遗 传连锁图。利用120个Xa2区域的SSR标记进行了抗感亲本多态性鉴定，发现 的距离。 3．根据这6个基因序列分别设计跨内含子的特异引物，从接种T7147后的IR24和 但RGAl2仅在IRBB2中表达。将这2个基因确定为Xa2的候选基因。 4．对这2个侯选基因设计引物，进行长片段扩增，得到2个候选基因的全长序列， 经质粒操作连接到表达载体pCAMBIAl301S中，电击入农杆菌。经农杆菌转化， 将候选基因转入感病材料台北309和牡丹江8号中，获得再生植株。在苗期对2 个候选基因的转化植株进行PCR鉴定，保存阳性单株。孕穗期接种鉴定，未能 发现抗病能力较转化材料有明显改变的单株。 5．分别构建两个候选基因的RNAi表达载体，电击入农杆菌。经农杆菌转化，将 RNAi表达载体转入抗病亲本材料IRBB2中，获得再生植株，进行遗传功能验 证。 关键词：水稻白叶枯病；图位克隆；Xa2；RGA；NBS-LRR；RNAi Abstract Bacterial Xanthomonas oneofthemost by oryzae blight(BB)，caused pv．Oryzae，is seriousdiseaseoffice resistantcultivarsisthemosteffectiveand worldwide．Developing meansof thisdisease．Aboutbacterialresistance economical controlling thirty blight inricehavebeen of 7、xa5andxal3 genes identified，sixthem，Xa21、Xal、Xa26、Xa2 havebeencloned a based BBresistance successfullybymap cloningapproach．The gene， toT71 Xoorace Wasidentifiedandnamed resistance Xa2，confersspecific 74(Japan2)．It Was onthechromosometo Sakaguchi(1967)．Furthermore，Xa2