外源性神经生长因子(NGF)对庆大霉素耳毒性阈移影响的实验的研究.pdfVIP

中文摘要 外源性神经生长因子(NGF)对庆大霉素耳毒性阈移 影响的实验研究 摘 要 目的：无论临床观察或实验研究均证明许多药物和化学 试剂具有耳毒性，可引起耳蜗和前庭中毒性损害，造成耳聋 种学说：(1)影响了磷酸肌醇、三磷酸肌醇、二脂酰甘油问 转化从而导致细胞内钙离子浓度的变化；(2)抑制G蛋白和 鸟氨酸脱羧酶活性；(3)氨基糖甙类抗生素能引起内耳毛细 胞的凋亡。在过去近半世纪里，国内外学者对氨基糖甙类抗 生索的耳毒性机制及其防治进行了大量的研究工作，虽然取 得了一定成绩，但并不尽人意。神经营养因子(neurotrophic factors，NTFs)是一类能支持神经元生存和诱导神经突起生长 的化学物质，在神经元的发育、轴突的生长、递质的合成以 及细胞的凋亡等阶段均起着重要作用。细胞的存活、迁移、 生长、分化、与其他细胞建立功能性联系、甚至损伤后神经 元的存活及再生等均受这类物质影响，神经营养因子的失常 或不足，可能是导致某些神经疾患或神经再生障碍的原因。 神经营养N寻：(NTFs)X具有促进听觉神经系统发育并维持 其正常功能的作用，其作用贯穿于从听板形成直至Corti器 毛细胞与传入、传出神经末梢纤维之间建立突触关系的全过 程。而神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)是神经营养因 子家族中最具代表性的一员，故研究神经生长因子对庆大霉 中文摘要 素耳毒性阈移的影响，有助于探讨其作用机制，并为临床治 疗庆大霉素引起的听力损失提供理论依据。 方法：采用昕脑干反应及耳蜗螺旋器毛细胞扫描电镜观 察来分析NGF对庆大霉素耳毒性闽移的影响，具体步骤如 下：(1)实验动物及处理。选择耳廓反射正常的健康白色雄性 豚鼠30只，体重250～3009；按原始体重由小至大编号后， 随机分为生理盐水对照组(NS组)、庆大霉素对照组(GM+NS 0只(20耳)。 组1及神经生长因子实验组(GM+NGF组)，每组1 其中NS组10只豚鼠作为电镜观察的正常对照标本，该组实 验豚鼠腹腔注射生理盐水lml／kg-d，连续4周；GM+NS组： 腹腔注射生理盐水lml／kg·d，相隔15min～30min后腹腔注射 NGF1000 u／kg·d，相隔15min～30min后腹腔注射庆大霉素 brainstem 开始前1天，测试豚鼠听脑干反应(auditory response，ABR)，注射庆大霉素后开始每周测试ABR一次。 听脑干反应测定，采用Keyponit型4通道脑干听觉诱发电位 测试仪，测定豚鼠清醒状态下的听脑干反应。记录电极置于 颅顶部，参考电极和接地电极分别置于同侧和对侧乳突部， 观测所有波形，以ⅡI波刚刚出现时的短声刺激强度的dB值 作为ABR的阈值。(3)扫描电镜标本制作及观察。从3组中 各选择3只豚鼠，取其左耳耳蜗作为扫描电镜观察对象。在每 只豚鼠完成最后给药及听脑干反应测试后(实验开始后4周) 立即断头，迅速提取双侧颞骨，在解剖显微镜下打开听泡， 刺破圆窗膜，取出镫骨，蜗尖钻孔，2．5％戊二醛固定液行蜗 内灌注，10％EDTA脱钙15天，4。C条件下在解剖显微镜下 中文摘要 用分离针剥除耳蜗骨壳，剥完后再用2．5％戊二醛液固定4h， 然后用O．1mol／L磷酸缓冲液中漂洗3次?每次10min，于 1％锇酸中固定2h，再经磷酸缓冲液漂洗、乙醇梯度脱水和 干燥，金属镀膜，再用扫描电镜观察耳蜗螺旋器毛细胞的结 构变化。 结果：(1)ABR阈值改变。受试豚鼠经腹腔注射庆大霉 素(GM)120mg／kg·d连续4周后，观察其ABR阈值的改变， 发现正常对照组无明显听力损失，GM+NS组和GM+NGF 组均有听力损失，表现为ABR阈值上移，其中以GM+NS 组最为明显，GM+NGF组较轻。腹腔注射庆大霉素停止后 (实验开始后第4周)，GM+NS组豚鼠平均阈移为 较，腹腔注射庆大霉素全部结束后的第1周、2周、3周、4 庆大霉素结束后第1周外，均