BDNF 通过 AKT／mTOR／70S6K 途径影响Aβ25-35诱导的 HT22细胞自噬的研究.pdfVIP

356 新医学2015年6月第46卷第6期 基础研究论著 BDNF通过 AKT／mTOR／70S6K途径影响 Ap25 诱导的HT22细胞 自噬的研究 范胜诺 张蓓 谷贝贝 廖旺 刘军 【摘 要】 目的 探讨脑源性神经生长因子 (BDNF)对抗B一淀粉样蛋白 的神经毒性作用是 否与 自噬有关，以及该 自噬过程是否通过蛋 白激酶B(AKT)／哺乳动物雷帕霉素靶蛋 白(mTOR)／核糖 体蛋 白S6激酶(70S6K)途径调控。方法 将AB25-35加入不同浓度BDNF预处理后的HT22细胞共孵育 24h，采用CCK8法测细胞活力 ；将 AB 及加或不加 BDNF、Rapamycin、LY294002处理 HT22细胞 24h，采用蛋 白免疫印迹法检测LC3、P—AKT、p-70S6K的表达；采用免疫荧光法检测细胞核周 自噬斑 点变化情况。结果 BDNF能改善细胞活力，以100ng／ml时最为显著 (P0．05)；AB 升高LC3一 Ⅱ／I比值，降低 p-AKT、p-70S6K的表达，并增加细胞 自噬斑点数量 (P均 0．05)；BDNF能增强 AB25。5诱导的自噬活动，该增强作用可被LY294002抑制 (P均 0．05)。结论 BDNF能对抗 Ap25。5 的神经毒性，与通过AKT／mTOR／70S6K途径增强A31， 诱导的HT22细胞 自噬相关。 【关键词】 脑源性神经营养因子；3-淀粉样蛋白 ；HT22细胞；自噬 EffectofBDNF on A -induced autophagy viaAKT／mTOR／70S6K pathway in HT22 cells Fan Shengnuo，ZhangBei，GuBeibei，LiaoWang，LiuJurLSunYat—senMemorialHospitalofSunYat—senUniver- sity，Guangzhou510120，China CorrespondingAuthor，LiuJun，E—mail：docliujun@126．con A【bstract】 Objective Toinvestigatethecorrelationbetweenneuroprotectiveeffectofbrain-derived neurotrophicfactor(BDNF)againstAmy|oidp—proiein25。5neurotoxicity，andvalidatewhethertheautophagy wasregulatedbyproteinkinaseB (AKT) ／mammaliantargetofrapamycin(mTOR)／ribosomalproteinS6 kinase(70S6K)signalingpathway．Methods A3125。5wassupplementedandco—culturedwiththeHT22cells pretreatedwithdifferentconcentrationsofBDNF for24 h．TheviabilityofHT22 cellswasevaluated bycell countingkit-8(CCK8)．Theexpressionlevelsofmicrotubule—associatedproteinlightchain3(LC3)，p-AKT， p-70S6KinHT22cellsweredetectedbyWesternblotaftertreatedwithA3125。5inthepresenceorabsenceof BDNF，rapamycin，LY294002for24h．Immunofluorescenceassaywasperformedtoobservethechangesinthe LC3punctaintheperinuclearregionofHT22cells．Results BDNFcouldimproveHT22cellviability，espe- ciallyattheconcentrationof100ng／ml(P0．05)．Ap25。5elevatedtheLC3一H／Iratio，down—reuglatedthe expressionofp-A