《一个有利于细胞色素P450BM-3催化吲哚合成靛蓝的三位点突变酶：D168L／E435T／V445A》.pdfVIP

第 65卷 第 4期 化 工 学 报 Vb1．65NO．4 2014年 4月 ClESC Journal April2014 翼雾 一 个有利于细胞色素P450BM．3催化吲哚合成靛蓝的 三位点突变酶：D168LE／435TV／445A 张彭湃 ，胡升 ，梅乐和 ，一，雷引林 ，金志华 ，姚善泾 (浙江大学生物工程研究所，浙江 杭州 310027； 浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院，浙江 宁波 315100) 摘要：为进一步提高P450BM．3催化吲哚合成靛蓝的能力，在前期获得的突变酶D168LE／435T基础上引入V445A 突变，获得突变酶D168LE／435T，、，445A，该突变酶与D168L／E435T及V445A相比，对吲哚的亲和力分别降低41．5％ 及 35．8％，转化数 ( )分别提高 1．61倍及 1-31倍，催化效率 ( rm )分别提高 1．53倍及 1．47倍；该突变酶 对电子的耦合率也提高至24．7％，较D168LE／435T提高39．5％，较V445A提高64．7％，说明该突变酶在电子的利 用率上有明显改善；此外，该突变酶催化副产物靛玉红的比例大幅降低，降低为D168LE／435T的41．7％及V445A 的30．6％，说明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更加有利于靛蓝形成。 关键词：生物催化；酶；分子生物学；P450BM．3；吲哚；羟基化；靛蓝 DOI：10．3969~．issn．0438-1157．2014．04．030 中图分类号：TQ962．2 文献标志码：A 文章编号：0438—1157(2014)04—1374—07 A triplemutantimprovingactivityofcytochromeP450BM -3tocatalyzeindole hydrOxylati0n：D168L／E435T／V445A ZHANG Pengpai，HU Sheng，M E1Lehe，-，LEIYinlin，JIN Zhihua2 , YAOShanjing (InstituteofBioengineering,Zh~iangUniversity，Hangzhou310027，Zh~iang,China； SchoolofBiologicalandChemical Engineering,NingboInstituteofTechnology，Ningbo315100，Zh~iang，China) Abstract：Tofurtherenhancehydroxylationabilitywith indoleofP450BM ．3．site—directedmutagenesiswith V445A wasintroducedtothemutantD168L／E435T obtained in earlierresearch．and mutantD168L／E435T／ V445Awasobtained．ComparedwithDl68LE／435TandV445A．mutantDl68L／E435TV／445A exhibitedlower affiniytwithindole，buthigherimprovedturnoverrate(at)．Correspondingly,catalyticefficiency( )was increasedto 1．53timesand 1．47timesrespectively．Theelectroniccouplingrateofthemutantwasalsoimproved by 24．7％．39．5％ higherthan thatofD168L／E435T and64．7％ h