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过表达人细胞S期激酶相关蛋白2（Skp2）促进MCF-7乳腺癌细胞生长及S期细胞增加.pdf
1306 细胞与分子免疫学杂志 (ChinJCellMolImmuno1)2015，31(1O
· 论著 · 文章编号：1007—8738(2015)10—1306—05
过表达人细胞 S期激酶相关蛋白2(Skp2)促进 MCF一7乳腺癌细胞生长及
S期细胞增加
杨成成 ，南克俊 ，秦思达 (西安交通大学医学院第一附属医院：肿瘤内科，胸外2科，陕西西安710061)
[摘 要] 目的 构建带 FLAG标签的细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因真核表达载体pcDNA3-FLAG-Skp2并检测其对MCF-7
乳腺癌细胞生长及细胞周期的影响。方法 采用反转录PCR从 MDAMB-231乳腺癌细胞中扩增skp2基因，构建重组真核表达
载体pcDNA3．FALG．Skp2。酶切及测序鉴定重组质粒正确后 ，脂质体介导转染至MCF-7乳腺癌细胞中。采用 Westernblot法检
测FLAG．Skp2的表达，Alamarblue比色法绘制细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞周期。结果 PCR扩增片段与预期片段大
小相符，测序结果与GenBank结果一致。Westernblot结果显示质粒转染48h后，细胞成功表达融合蛋白FALG—Skp2。过表达
Skp2的MCF-7乳腺癌细胞较对照组生长速度明显加快，S期细胞显著增多。结论 成功构建人 Skp2真核表达载体
pcDNA3．FLAG．Skp2。过表达skp2的MCF-7细胞生长加快，s期细胞增多。
[关键词]S期激酶相关蛋白2(skp2)；真核表达载体；MCF-7细胞；细胞周期
[中图分类号]R730。54，R392-33，Q279 [文献标志码]A
Over—expressionofhumanS-phasekinase-associatedprotein2(Skp2)promotes
proliferation ofM CF-7breastcancercellsand increasesthenmu berofS phase
ceHs
YANGChengcheng，NANKejun ，QINSida
DepartmentofOncology， DepartmentofThoracicSurgery，FirstAffiliatedHospital，SchoolofMedicine，Xi’anJiaotongUniversity，
Xi’an710061，China
[Abstract] Objective ToconstructaeukaryoticexpressionvectorforthehumangeneS-phasekinase-associated
protein2(Skp2)withaFLAGtag(pcDNA3一FLAG-Skp2)anddetecttheeffectofSkp2over—expressionoffthecellgrowth
andcellcycle in MCF-7 breastcancercells。Methods Skp2wasamplified frOm MDA-MB-231breastcancercellsby
reverse—transcriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)andthenusedtoconstructtheeukaryoticexpressionvector
pcDNA3一FLAG—Skp2．Integration ofSkp2 into the vectorwas confirmed via restriction digestand sequencing：The
pCDNA3-FLAG—SkpZwasthentransfected into MCF-7 breastcancercells．Expression ofSkp2 protein wasverified by
Westernblotting．CellgrowthwasassessedbyAlamarblueproliferationassay，cellcycleanalysiswascarriedoutbyflow
cytometry．Results ThePCRamplifiedfragmentwasmatchedupwiththeanticipatedresultanditssequencewasthesame
asthedatapublish
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