鸡传染性法氏囊病病毒BC6／85株VP 2基因的原核表达、纯化及鉴定.pdfVIP

2015，49(5)：17—21／刘 丹，等 中国兽药杂志 鸡传染性法 氏囊病病毒 BC6／85株 VP2基因的 原核表达 、纯化及鉴定 刘 丹，杨承槐，吴华伟，李启红，高金源，陈 建，郎洪武 (中国兽医药品监察所，北京 100081) [收稿 日期]2014—11-25 [文献标识码]A [文章编号]1002—1280(2015)05—0017—05 [中图分类号]$858．31 [摘 要] 为获得可用于鸡传染性法 氏囊病病毒 (IBDV)抗体检测的重组抗原VP2蛋 白，根据 GenBank中发表的IBDVVP2序列设计一对特异性引物。应用RT—PCR技术克隆IBDV经典标准攻 毒株(BC6／85株)的VP2基因，插入质粒 pET一32a中构建重组表达质粒 pET一32a—VP2，经 IPTG诱 导后获得 了以包涵体形式表达的重组蛋 白。重组蛋 白纯化后，Western—blot检测表 明具有 良好的反 应原性。本研究为下步建立IBDV抗体的间接 ELISA方法及新型疫苗的研制奠定了基础。 [关键词] 鸡传染性法氏囊病病毒；VP2基因；克隆；原核表达 ProkaryoticExpression，PurificationandIdentification ofVP2Gene ofInfectiOUSBursalDiseaseVirusBC6／85Strain LIUDan，YANGCheng—huai，wuHua—wei，LIQi—hong，GAOJin—yuan，CHENJian，LANGHong—WU (ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl，Being100081，China) Abstract：InordertoobtainrecombinantVP2antigenforchicken infectiousbursaldiseasevirus(IBDV) antibodydetection，apairofspecificprimerswere designedaccordingtothepublished sequenceofIBDV VP2 gene．TheVP2genewasamplifiedbyRT—PCR from IBDV BC6／85strainandclonedintopET一32avector，the recombinantplasmidpET——32a—。VP2wasinducedbyIPTG togettherecombinantproteinexpressedininclusion bodyofrms．Aftertherecombinantproteinwaspurified，Westernblotdetectionshowedthattheexpressedprotein hadgoodantigenicityandcouldbeusedofrIBDV antibodydetection．TheresearchprovidesafoundationforIBDV antibodydetectionresearchanddevelopmentofnewvaccines． Keywords：infectiousbursaldiseaseviurs；BC6／85Strain；VP2gene；prokaryoticexpression 鸡传染 性法 氏囊病 病毒 (InfectiousBursal 生的中和抗体能被动地保护宿主免受 IBDV的感 DiseaseVirus，IBDV)属于双RNA病毒科，其基因 染l2]，VP2还与病毒毒力、病毒抗原变异及细胞凋 组 由A和B两个双链 RNA片段组成，编码 5种病 亡等有关_4j，已成为近年来众多学者研究的热点。 毒蛋 白，分别为VP1、VP2、VP3、VP4和VP5_】]。其 众多研究人员利用 VP2的免疫原性研究抗 中VP2是 IBDV的主要结构蛋 白和宿主保护性抗 IBD的基因工程疫苗 ．已经在大肠杆菌、重组杆状 原，含有能诱导中和抗体的抗原决定簇 ，其诱导产 病毒、酵母等诸多表达系统中，成功表达 VP2蛋