基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱法分析人乳β-酪蛋白新生儿体外消化模型多肽组.pdfVIP

第43卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第5期 2015年 5月 ChineseJournal ofAnalyticalChemistry 631—636 DOI：10．11895／j．issn．0253~820．150001 2研 究报 告 《 石 ； 石 ＼ 基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱法分析 人乳 一酪蛋白新生儿体外消化模型多肽组 李相怡 方 曦 任皓威 程 琳 张 拓4 付 国红 刘 宁 1,2,3 (国家乳业工程技术研究中心 ，黑龙江省乳品工业技术开发中心，哈尔滨 150028) (东北农业大学食品学院，乳品科学教育部重点实验室 ，哈尔滨 150030) (食品安全与营养协同创新中心 ，哈尔滨 150028) (北京蛋 白质组学研究中心 ，北京 102206) 摘 要 通过体外模拟新生儿消化道条件 ，用基质辅助激光解吸离子化飞行时间串联质谱法 (MALDI．TOF／ TOF)探究人乳卢．酪蛋白消化后的多肽组。在离子源加速电压为20kv，激光波长337nm，激光频率200Hz， 离子延迟提取时间330as，质谱信号单次扫描累加2000次条件下，扫描质量范围m／z500～5000的肽段。结 果表明，消化后得到26个肽段 ，分子量集中在 1000～4000Da。与已知功能的肽段序列进行对比，人乳 一酪蛋 白在新生儿体外模型消化后未产生与已知功能的活性肽序列匹配的肽段 。但发现9个肽前体 ，其中含4个血 管紧张素转化酶 (ACE)抑制肽前体 ，2个酪蛋白磷酸肽 (CPP)前体，2个抗氧化肽前体，1个免疫活性肽前体， 由酶切位点推测分析，肽前体可以继续在蛋白酶作用下转化为生物活性肽 关键词 一酪蛋 白；新生儿；体外消化；多肽组；基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱 1 引 言 多肽组(Peptidome)是指器官、组织、细胞和体液中全部内源性多肽组分，包括生物体 内具有特殊功 能的活性多肽和蛋 白质代谢产生的多肽 ¨1]，多肽组学 (peptidomics)研究的是多肽组的成分、功能、变 化规律及其相关关系[2]，已应用于人体体液多肽组分析_4I5]。人乳以富含多种优质蛋 白质以及活性肽 等优点被公认是新生儿最好的食品，其 中／3．酪蛋 白的含量为 30％～35％_6础]，是人乳 中比重最大的酪 蛋白_9，加]。本课题组在人乳卢一酪蛋 白(尤其是中国人乳卢．酪蛋 白)的鉴定和结构功能方面已开展了前 期研究_1卜”j。目前，关于人乳 一酪蛋 白的研究集中于对其消化产物的分离、鉴定和生物学功能方 面l1 ，还没有针对人乳 一酪蛋白消化后多肽组学的报道 ，而研究人乳 ．酪蛋 白消化后的多肽组可以 为 日后研发更适合婴幼儿的配方食品提供参考。婴儿 (≤12月龄)尤其是新生儿(≤28日龄)的消化系 统尚未发育成熟，代谢旺盛，但蛋 白酶活性很低，胃蛋 白酶活性和分泌量与婴儿生长发育的时间成正相 关，而胰蛋 白酶的活性以及分泌量在 3 24月龄时也低于成年人[18,19]。本研究在普遍使用的婴儿体外 消化方法 20]基础上．根据新生儿蛋 白酶活性低的特点，建立了更适合研究新生儿体外消化的模型。以 此模型消化人乳 一酪蛋 白，用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱法分析其消化产物多肽组。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 GL．21M高速冷冻离心机(上海离心机械研究所)；Delta320型pH计和AL204精密电子天平 (瑞士 梅特勒．托利多有限公司)；真空冷冻干燥机(上海医用仪器厂)；DYY．IOC型电泳仪和转膜仪 (北京六 一 仪器)；凝胶成像系统 (美国Bio—RAD公司)；蛋 白质纯化仪 AKTApurifer100(美国GE公司)； AB4700MALDITOF／TOF串联质谱仪(美国AppliedBiosystems公司)。 2015-01-02收稿：2015-03．10接受 本文系”十二五”国家科技支撑计划课题 (No．2011BAD09B03)资助 E-mail：renhw8009