基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构.pdfVIP

第43卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 1期 2015年 1月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 63～68 DOI：10．11895／j．issn140385 基质辅助激光解析 电离质谱和 电喷雾质谱共 同快速确证达托霉素结构 黄亚娟 张拓 ， 韩治国 ， 孟晓光 ， 宋纯艳 ， 刘曙晨 郑俊杰 魏开华 “，，。 (北京正旦国际科技有限责任公司，北京 102206) (北京蛋白质组研究中心，蛋白质组学国家重点实验室，国家蛋白质科学中心(北京)，北京 102206) (军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850) 摘 要 运用基质辅助激光解析电离一飞行时间串联质谱 (MALDI—TOF／TOFMS)和电喷雾。四级杆．飞行时间 质谱 (ESI—Q—TOFMS)快速确证环脂肽达托霉素的结构。首先 ，ESI检测达托霉素相对分子量为 1619．7107，与 理论值偏差0．0007。选择其双电荷峰m／z809．848作为母离子进行ESI串联质谱 (MS／MS)测定，成功匹配了 达托霉素环外氨基酸序列 C9H9CO—Trp—Asn—Asp。其次，优化 LiOH裂解达托霉素的实验条件，以MALDI． TOF／TOFMS监测开环效果 ，获得95％以上的开环样本后 ，分别运用MALDI和ESI进行MS／MS测定，达托霉 素开环产物的b和y全部被匹配，达托霉素全部氨基酸序列得到确证。最后，对开环产物的ESI—MS／MS条 件进一步优化，获得了丰富的低端碎片离子，解析了脂肪酸链结构，并绘制了脂肪酸链的裂解图。本方法快 速、简便、准确，是确证环脂肽类化合物结构的可靠方法。 关键词 达托霉素；环脂肽；串联质谱；电喷雾质谱 1 引 言 达托霉素 (Daptomycin)是从玫瑰孢链霉菌(Streptomycesroseosporus)发酵液中提取的一种新型环脂 肽类抗生素，能迅速杀死绝大部分革兰氏阳性菌，并且在体外对已呈现甲氧西林、万古霉素和利奈唑烷 等耐药性质的分离菌株具有强活性…。达托霉素分子式为 C，：H。。N。O ，含 1个亲水核及 1个亲脂 尾 J，它具有新颖的化学结构：4位苏氨酸 (Threonine，Thr)的羟基与末尾 13位犬尿氨酸(Kynurenine， Kyn)的羧基生成酯键，形成含 10个氨基酸的环肽；1位色氨酸(Tryptophan，Trp)的J7、r末端与十碳脂肪 酸形成酰胺键，封闭了肽段的Ⅳ端 ；分子中包括 3个非蛋 白源的特殊氨基酸：鸟氨酸 (Ornithine， Om)，3一甲基谷氨酸 (3-Glutamicacid，3-mGlu)和 Kyn J。化学结构见图1。 达托霉素的结构确证难点是需同时确 证环肽的氨基酸序列和环上的脂肪酸链结 构，尤其还包含多个非天然氨基酸。目前， 国内对达托霉素的研究报道多集中在提 取、分离、合成和抗菌活性上 ～]，未见对 其结构鉴定。虽然，对其结构鉴定已有文 献报道 J，但是多采用核磁共振法 ，而核磁 共振法具有样品用量大、解谱复杂、分析时 间长等缺点。近年来质谱技术得到了广泛 图1达托霉素缮陶 的应用和发展，基于软 电离技术的 ESI质 Fig- Structureofdaptomycin 谱和基质辅助激光解析电离质谱 (MALDI—MS)是两种最常用的生物质谱，是蛋白质和多肽结构确证的 重要手段 。本研究利用 MALDI和ESI质谱成功地对达托霉素进行了一级结构确认，方法简便、快 2014-04-30收稿；2014-09-22接受 本文系国家高技术研究发展计划 863项 目(Nos．2012AA020205，2014AA020906)、国家科技部传染病重大专项 (No．2013Z 001-001)、国家重大科学仪器设备开发专项(No．2012YQ1801171