共刺激分子B7基因诱导小鼠抗宫颈癌主动免疫的分析.pdfVIP

溯南 医科大4卜49口士研究生x仑j吃 共刺激分子B7基因诱导小鼠抗宫颐癌主动免疫研究 摘 要 恤o免疫应答中T细胞的活化需双信号。肿瘤细胞或强或弱 具备特异性抗原，即具备第一信号，但却缺乏第二信号的共刺激 作用，导致机体不能对其产生免疫排斥反应。B7分子是最重要 的共刺激分子之一。上皮性肿瘤 如宫颈癌 中缺乏或低表达B7 分子。为了探讨B7基因能否在体内诱导抗宫颈癌主动免卿本 研究将B7基因导入小鼠宫颈癌U14细胞，通过G418筛选、 Southern杂交鉴定，证实B7基因己导入U14细胞，建立高效表 达B7的U14细胞株即B7U14细胞。随后分4组进行体内实验， 飞1,将基因型B7U14细胞 1x107 移植入近交系615系小鼠皮 下 n 6 .2、将B7U14细胞 0.1-0.2x107 免疫615系小鼠， 然后再将野生型U14细胞 1x107 移植入此经B7U14免疫的 小鼠 n 6 。3、移植等数量的野生型U14细胞至近交系615 系小鼠皮下作对照组 n 6 .4、将野生型U14细胞 0.1-0.2x107 免疫615系小鼠，然后再将野生型U14细胞 1x107 移植入此 经野生型U14免疫的小鼠 n 6 。观察4组小鼠的成瘤情况、 生存期。结果:将B7基因转染入U14细胞后获得了一些B7高 表达克隆株 B7U14 ，将其细胞基因组DNA进行Southem杂 交呈B7DNA阳性，而野生型U14细胞基因组DNA用B7DNA 杂交呈阴性。1、皮下接种B7`U14细胞的小鼠，显著地降低了 致瘤性，早期均能形成小肿瘤，其中3/6只小鼠在32天内肿瘤 湖甫 医科大学硕士研究生宁仑j吃 完全消失，长期存活。2/6只小鼠50天后肿瘤呈进行性生长，平 均生存期为65天。而对照组肿瘤均呈进行性生长，平均生存期 为28天。基因型B7U14小鼠的出瘤时间延迟，肿瘤生长速度 减慢，于皮下接种 14天后，基因型与野生型小鼠体内的肿瘤大 小差异有显著性 t--7.413,P 0.01 .2、先用B7`U14细胞免疫再 接种野生型U14细胞的小鼠有5/6只无肿瘤生长。先用野生型U14 细胞免疫再接种野生型U14细胞的小鼠均见肿瘤生长匀结论:B7 基因导入小鼠宫颈癌U14细胞能诱导机体有效的抗一肿瘤主动免 疫应答。提示应用B7基因导入法可能成为临床治疗宫颈癌的有 效方法。 关健词: 宫颈癌 B7基因 U14细胞 生存期 湖南 .正冲斗大翅卜闷民士研究生论义 Studyofanti-tumorimmuneresponsetocervicalcarcinoma 沁miceinduced勿constimulatorymoleculeB7gene Abstract O场ectToinvestigatetheeffectsofB7constimulatorymolecule oninducing tocervicalcarcinomain vivo Methods Arecombinantretroviralplasmidvectorexpressing miceB7-1gene pLNSX-mB7 wastransfectedintomicecervical carcinomacelllineU14勿eiectroporation.Thetransfectantswere selectedinRMP1640containingG418400ug/m1,andseveralhigh- expressedmB7-1U14cellcolonystrain B7U14 weredetected勿 southernblot.Experimentsinvivoinclude: 1 1X10B7U14cells wereinoculatedintothebackof615strainmicebysubcutaneously injectiontodeterminetheirtumorigeniciyt n 6 . 2 Themice primedbyB7U14cellswerere-challengedwiththesamemountof wildtypeU14toobservetheimmuneprotectionofthesemiceagainst thewildtypeU14 n 6 . 3 Ascontrol,wildtypeU14cellswere inoculatedthesameastheexperimentalgroup n 6 . 4 Themice prunedbywildtypeU14cellswerere-challengedwiththesame mountofwildtyp