苯并(a)芘对殖黑鲷(Sparus macrocephalus)CYP1A1基因表达及其酶活性的诱导研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 在对水生生态系统污染监测中,鱼类 CYP1A 的诱导已被作为暴露于PAHs 、 PCBs 、二噁英以及相关化合物的早期预警信号及高度敏感的生物反应。本研究 利用生物学方法探讨 PAHs 的典型代表物 BaP 暴露对养殖黑鲷的 CYP1A1 mRNA 的诱导和对肝脏EROD 活性的影响，以期在分子水平筛选出合适的生物 标志物，检测水环境中有机污染。取得以下结果： 1. 从养殖黑鲷（Sparus macrocephalus ）的肝脏中克隆得到 CYP1A1 cDNA （Genbank 登录号 DQ898145 ），经过序列分析比对，和鲷科其它鱼类的 CYP1A cDNA 同源性大于90 ％，含有P450 cDNA 和 CYP1A cDNA 的特征 序列，是 CYP1A 亚家族的新成员。 2. 利用RT-PCR方法检测BaP暴露对黑鲷肝脏CYP1A1 mRNA表达的影响。鱼体 在暴露于 BaP6h 后肝脏 CYP1A1 mRNA 的表达就受到诱导，不同浓度组达到 最大表达量的时间不同，5μg/L 组和 0.2μg/L 组在诱导后 12h 表达量最大， 1μg/L 组在诱导后 24h 达到最大，之后下降到正常甚至低于正常水平。 3. 利用 Dot －blot 方法检测 BaP 暴露对黑鲷肝脏 CYP1A1mRNA 表达的影响。 在诱导 6h 后，肝脏 CYP1A1 mRNA 表达量提高，统计分析表明（ANOVA 分析和 Dunnett t-test ），诱导 12h 后 5μg/L 组黑鲷肝脏 CYP1A1 mRNA 的表 达量和和对照组相比有显著的差异（p0.05 ），1μg/L 组黑鲷肝脏 CYP1A1 mRNA 的表达量和对照组相比有极显著的差异（p0.01 ）。 4. 利用 Dot －blot 方法检测 BaP 暴露对黑鲷鳃 CYP1A1 mRNA 表达的影响。 鳃 CYP1A1 mRNA 的表达受到明显的诱导，各个浓度组在 6h-12h 和对照 组相比，有极显著的差异（p0.01 ）,实验证明鳃中 CYP1A1 的变化是比肝 脏 CYP1A1 更为敏感。 5. 检测黑鲷暴露于不同浓度 BaP 后肝脏的 EROD 活性，并分析了与 CYP1A1 mRNA 诱导表达的相互关系。黑鲷暴露于 BaP 后，其肝脏 CYP1A1 mRNA 水平的诱导早于 EROD 活性的诱导，在暴露后 12h 和 24h 二者均符合剂量 效应关系。 关键词：黑鲷；苯并(a)芘；CYP1A1； EROD 活性 I ABSTRACT ABSTRACT CYP1A gene is highly inducible by polyaromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCB’s),dioxins and related compounds.Induction of CYP1A1 in fish has been evaluated as a sensitive method in monitoring contamination in aquatic systems. The research detect the effect of BaP, typical representative of PAHs, on the caged black porgy by measure of liver organs CYP1A1 mRNA expression and the activit