生物化学检验技术的研究进展新.ppt

生物化学检验技术研究进展 赵晓君 主要内容 概念 临床生物化学是研究器官、组织人体体液的化学组成和进行着的生物化学过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。 临床生物化学 19世纪以来，随着医学科学的发展和实验室检测需求的增加，一些化学家利用化学分析的手段实现了对人类体液、血液某些生化指标的定量分析，如血糖、尿素氮等，继之又逐渐建立了一些酶活性的测定方法，这些利用化学手段建立的用于分析患者体液、血液特定化学成分的方法对促进临床医学由经验医学向现代医学转变起了巨大的促进作用，逐渐形成了一门独立的学科—— 临床化学(Clinical Chemistry)，国内习惯称此学科为生化检验。此学科一直延续到今天，已发展壮大为不可缺少的医学领域。 临床生物化学发展的重大突破 “临床化学”名称的由来 体液生物化学组分的分析应用及“细胞内环境相对稳定”概念 比色法和光度法在临床生物化学实验室中的应用 血清酶活力测定作为细胞和组织损伤的指标 治疗性药物监测成为临床生物化学的一个重要分支 超微量的仪器分析、免疫学、分子生物学、放射性同位素等技术在生物化学实验室中的应用 自动化装置和超微分析 生化检验的常规技术 一、光谱分析技术 二、电泳技术 三、离心技术 四、层析技术 五、电化学分析技术 光谱分析技术 定义：利用各种化学物质(包括原子、基团、分子及高分子化合物)所具有的发射、吸收或散射光谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。根据物质对光谱响应特征的不同，可把光谱分析技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。它既可以研究物质的结构，也可以对特定物质进行定性或定量分析。 分光光度法 原理：利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法或分光光度技术，使用的仪器称为分光光度计 。 应用：氨基酸含量的测定、蛋白质含量的测定、核酸的测定、酶活力测定、生物大分子的鉴定和酶催化反应动力学的研究 层析技术 原理：层析技术是一种物理的分离方法。无论何种层析，其系统通常由互不相溶的两个相组成：一是固定相（固体或吸附在固体上的液体），一是流动相（液体或气体）。层析时，利用混合物中各组分理化性质（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、溶解度等）的差异，使各组分不同程度地分布在两相中，随着流动相从固定相上流过，不同组分以不同速度移动而最终被分离。 分类 吸附层析 分配层析 凝胶层析 离子交换层析 亲和层析 聚焦层析 离子交换层析（ion-change chromatography） 亲和层析（affiuity chromatography） 聚焦层析（Chromatofocusing） 电泳技术 原理：电泳是带电颗粒在电场作用下向着与其电荷相反的电极移动的现象 。许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子组成、性质及其所在介质的pH。如果混合物中各组分的结构组成不同，在某一pH溶液中，各组分所带电荷性质、电荷数量不同，加之其分子量不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速度也各异，而达到分离鉴定各组分的目的。 电泳技术分类（按实验装置分类） 常用电泳技术 SDS原理： 当SDS（Sodium Dodecyl Sulfate,十二烷基硫酸钠）与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，并远远超过了其原来的电荷，从而使天然蛋白质分子间的电荷差别就降低乃至消除了。与此同时蛋白质在SDS的作用下结构变得松散，形状趋向一致，所以各种SDS-蛋白质复合物在电泳时产生的泳动率差异，就反映了分子量的差异。在此条件下，样品分子量的对数与其在凝胶中的迁移率呈直线关系。 应用: 测定蛋白质分子量 测定蛋白质亚基数 等电点聚焦 原理：在一定抗对流介质（如凝胶）中加入两性电解质载体(Ampholyte,是一种多氨基多羧基的混合物，由异构物和同系物组成，其pK和pI值各自相异却又相近），当直流电通过时，便形成一个由阳极到阴极pH值逐步上升的梯度。两性化合物在此电泳过程中，就被浓集在与其等电点相等的pH区域，从而使不同化合物能按其各自等电点得到分离。 应用： 高效率分离纯化蛋白质 测定蛋白质分子量 离心技术 原理：离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。颗粒的沉降速度取决于离心机的转速及其自身与中心轴的距离。不同大小、形状和密度的颗粒会以不同的速度沉降。 电化学分析技术 定义：