hg2+对p.eiognathi及荧光素酶体外发光体系发光性能的作用机理研究.pdf

Hg计对P．1eiognathi及荧光素酶体外发光体系 发光性能的作用机理研究 摘要 本文通过研究有毒重金属H92+对鳆发光杆菌YL(Photobacterium leiognathi) 发光性能的影响途径，为今后其它有毒物质的研究提供参考。以探索P．1eiognathi YL的进一步开发和利用提供理论依据为出发点，研究了H矛+在不同的作用方式 础上又进一步分离纯化了细菌发光系统中最重要的酶一荧光素酶，并研究了H92+ 对荧光素酶的发光动力学影响。 1、对P．1eiognathiYL与发光相关的基本生理特性规律进行了研究。 5℃，l5Or／mi P．1eiognathiYL的菌体发光强度高，肉眼可见。细菌在2 n摇床 恒温培养条件下，4h开始进入对数生长期，9h进入生长稳定期，可持续稳定发 光20h以上。建立的检测P．1eiognathiYL活菌数的MTT法与比浊法相比，能更 准确和真实的反映活菌数量。同时MTT法又比平板稀释法、自动菌数测定仪法、 血球板计数法等更方便且受干扰因素少。建立的检测标准曲线的线性关系为， YL 以生长状态为参考的发光曲线和lux基因表达曲线。 YL发光强度与H92+浓 性毒性的测定一发光细菌法为参照，建立了P．1eiognathi YL的细胞活性， 度的线性关系，并研究了在此线性范围内H92+对P．1eiognathi 发光强度，?珊基因表达量及体内荧光素酶活性的影响。结果包括：1)在0-0．2m2／L YL的发光抑制率呈良好的 的H92+浓度范围内，H92+的浓度与其对P．1eiognathi YL菌体的死亡 线性关系，其相关系数R20．98；2)在此范围内，P．1eiognathi YL发光受抑制的程度也具有良好的相关性(《O．96)；3) 率与P．1eiognathi YL的发 虽然lux基因的表达也受到了一定程度的抑制，但其变化与P．1eiognathi 光变化没有明显的相关性；4)H92+没有影响到细菌体内的荧光素酶的活性 YL的发光抑制主要是导致了 (p0．01)。从实验结果来看，H92+对P．1eiognathi 细菌的死亡。从SEM图上可以直观的看到细菌的死亡状态。 YL生长过程中对细菌生理特性的作用。在同样 基中，研究了H92+在P．1eiognathi 的培养条件下，H92+环境中细菌的生长和发光在时间上都出现了延迟，但可以达 到最高的发光强度。当以细菌数量为参考坐标比较时，相同的菌体密度下，在 YL的发光反而高于正常生理状态下的 H92+的环境中生长的Pleiognathi YL的发光强度与lux基因表达的积分值具有相关性， PleiognathiYL。P．1eiognathi 且两种情况下的对应关系相同。从实验组细菌中提取的荧光素酶的活性与对照组 的没有显著性差异(pO．01)。从实验结果来看，H92+诱导了，纵基因的表达，从 YL的发光规律。但是，蜮基因对菌体发光的调控及体内发 而改变了P．1eiognathi 光系统都没有受到影响。 4、纯化荧光素酶，研究了H22+对荧光素酶发光动力学的影响。通过硫酸