l.caseieps对小鼠派氏集合淋巴结cd4+t分化为th17细胞及其分泌th17趋化因子的影响.pdf

摘要 摘要 acidbacteria 乳酸菌胞外多糖(1actic exopolysaccharides，LABEPS)是乳酸菌在生长代谢过 程中分泌到细胞壁外的一种糖类化合物，具有抗肿瘤、增强免疫力、调节胃肠道功能等多种 生物学活性，而且以其安全、无毒性，受到越来越多的青睐。目前国内对其免疫机制的研究 并不深入。派氏集合淋巴结(peyer’patches，PP)被认为是肠黏膜免疫应答的启动位点，在肠道 免疫耐受及防御感染方面起到关键作用，PP中含有各种各样的免疫细胞，由自身产生或由外 界迁移而来，包括抗原递呈细胞，T、B淋巴细胞等，而Thl7型T细胞是近几年新发现的效 应型T细胞，由CD4’T细胞分化而来，主要分泌IL．17、IL．21等细胞因子，被认为是调控 各种微生物感染的关键，且在T1117型应答在炎症性肠病中发挥主导作用。许多研究表明， casei 在众多的乳酸菌多糖中，干酪乳杆菌胞外多糖(Lactobacillus EPS)具有较为突出的免疫调节特性，本研究主要探讨L．caseiEPS对小鼠派氏集合淋巴结中 CD4’Y细胞的Thl7方向的分化及其具体途径的影响，以及T1117细胞迁移至PP中的必要条 件的影响，在这些方面阐明干酪乳杆菌胞外多糖的免疫调节机制。 本研究主要包括以下内容：(1)将干酪乳杆菌的发酵液，经过三氯乙酸除蛋白、醇沉、透 析等操作步骤，分离得到EPS。(2)用不同浓度的L．caseiEPS溶液对6组BALB／c小鼠进行连 续7天的灌胃饲养，处死后分离派氏集合淋巴结。(3)用ELISA方法分析小鼠派氏集合淋巴结 中Thl7分化成熟分泌的标志性因子IL．17、IL一21和IL一22的表达，并用流式细胞仪检测PP 中Yhl7细胞数量，观察L．casei 表达，用westernblot技术分析其分化过程中关键核转录因子RORm的表达；用ELISA方法 分析Thl7分化过程的主要抑制因子IL一4、IFN吖、IL一2的表达，观察L．caseiEPS具体是以什 迁移所需的主要趋化因子CCL20的表达，观察L．caseiEPS对其向PP中迁移的必要条件的影 响。 本研究主要得到以下结果：(1)三．caseiEPS能够诱导小鼠派氏结集合淋巴结分泌Thl7型 细胞因子IL一17、IL．21和IL．22等，但同时也对这些因子的分泌起到了适当的控制作用，呈 现出双向调控的免疫调节能力。(2)EPS能促进PP中Thl7分化特异性转录因子RORvt的蛋白 Thl7 表达，说明EPS对11117细胞的分化，是通过RORl，t发挥作用的。(3)EPS能够刺激PP 分化过程中重要细胞因子TGF—B、IL．6、IL．23的分泌，说明多糖可通过诱导这些因子的分泌 互制约，又相互促进的交叉性平衡调节。(5)EPS能够促进Thl7迁移的必须趋化因子CCL20 的蛋白表达及其mRNA的转录，而且这种促进作用具有保守性。由此可见，EPS能够通过调 节PP分泌不同类型的细胞因子及趋化因子，诱导肠道PP启动Thl7型免疫应答，同时也抑 制了过度的Thl7应答，控制自身免疫等机体损伤的发生，同时对Thl7细胞的迁移创造了条 件，可以预测在炎症小鼠肠道内，Thl7细胞将由肠黏膜向PP中迁移发挥免疫调控作用。 综上所述，本研究可以得出以下结论：干酪乳杆菌胞外多糖可诱导小鼠派氏结合淋巴结 的CD4’T细胞的Thl7型分化，并可抑制其过度分化，能够促进Thl7细胞由肠黏膜向PP迁 东北农业大学工学硕士学位论文 移。 关键词乳酸菌胞外多糖；派氏集合淋巴结；CD4+T细胞；11117细胞；分化；迁移 Abstract Effectof from Exopolysaccharide of