l.casei外多糖对balbc小鼠腹腔巨噬细胞及小肠巨噬细胞免疫调节作用.pdf

摘要 摘要 acidbacteria 乳酸菌胞外多糖(1actic exopolysaccharides，LABEPS)是乳酸菌发酵产生于细 胞外的一种水溶性多糖，普遍存在于酸乳和干酪等发酵食品中，具有丰富的生物活性，如抗 肿瘤活性、免疫调节活性及调节胃肠道功能活性等等，且无毒副作用，因此受到了人们广泛 的研究与应用。目前关于乳酸菌胞外多糖的物理化学性质，生理功能等方面的研究比较多， 但是在分子和细胞水平的深入研究比较少，比如对腹腔巨噬细胞(peritonealmacrophage)、小 intestine 肠巨噬细胞(small macrophage)免疫调节作用，还不清楚。因为巨噬细胞在炎症反 应中发挥重要作用，其产生的多种细胞因子和炎症介质是炎症反应发生、发展、协调与消散 的内在机制。本研究主要探讨干酪乳杆菌胞外多糖对腹腔来源巨噬细胞生长的影响、吞噬功 能的影响、分泌细胞因子的影响及对小肠巨噬细胞免疫活性的影响，阐明干酪乳杆菌胞外多 糖的免疫调节机制。 本研究主要包括以下几个方面：(1)通过腹腔注射法，提取BALB／c小鼠腹腔巨噬细胞， 量和不同作用时间下，干酪乳杆菌EPS对小鼠单核巨噬细胞J774A．1及原代腹腔巨噬细胞增 殖的影响。(3)倒置显微镜下，观察干酪乳杆菌EPS对小鼠单核巨噬细胞J774A．1及原代腹腔 巨噬细胞的形态学影响。(4)用酶标仪和紫外可见分光光度仪分析J774A．1细胞及原代腹腔巨 噬细胞吞噬中性红的量，生成NO、H202和02‘·的量，研究EPS对腹腔来源巨噬细胞吞噬功 能的影响。(5)采用双抗体夹心ELISA法分析EPS对腹腔来源巨噬细胞和小肠巨噬细胞分泌 促炎症因子IL．1B和TNF．Q以及抑炎症因子IL．10的影响。(6)用酶标仪和紫外可见分光光度 仪分析小肠巨噬细胞吞噬中性红的量及生成NO的量，研究EPS对小肠巨噬细胞吞噬功能的 影响。 浓度为400 止f脂多糖)LPS导致的J774A．1细胞生长的抑制状态，促进由LPS处理后细胞的生长，并且 达到185o／o_4：9．7：EPS对原代腹腔巨噬细胞的生长没有明显的作用，原代腹腔巨噬细胞在体 外不能随着时间的延长而分化增殖，是有限细胞系，不同于无限细胞系的J774A．1细胞，LPS 能微量的减少原代腹腔巨噬细胞的细胞数目，EPS能恢复LPS引起的原代腹腔巨噬细胞数量 细胞形态并未发生较明显的变化，EPS处理原代腹腔巨噬细胞后细胞数目没有增多，细胞形 态也未有明显的变化，即EPS对细胞没有细胞毒性作用：用LPS处理细胞后，两种腹腔巨噬 细胞形态均发生明显变化，EPS能够恢复由脂多糖导致的巨噬细胞形态的变化。(3)发现EPS 能显著的提高腹腔来源巨噬细胞的吞噬能力(尸0．05)，400 pg／mL的EPS对腹腔来源巨噬细 胞的吞噬能力的促进作用最明显；同时EPS能显著的抑制由LPS导致的两种巨噬细胞吞噬功 能的增加。(4)EPS能显著的促进腹腔来源巨噬细胞分泌细胞因子IL．1B、TNF—c【和IL一10， 东北农业大学工学硕士学位论文 抑制由LPS导致的腹腔来源巨噬细胞分泌促炎症因子IL．11B、TNF一旺的增多，促进LPS抑制 的巨噬细胞分泌IL．10；小肠巨噬细胞几乎不分泌IL．1ib、TNF一Ⅱ和IL一10，EPS处理小肠巨 o且不呈剂量依赖关系，这对小肠免疫耐受 噬细胞后只是略微的分泌IL．113、TNF．旺和IL．1 的维持具有重要的意义。(5)EPS能促进小肠巨噬细胞吞噬中性红的能力，当EPS浓度为 100 I．tg／mL，200I_tg／mL和400rtg／mL时能够极显著的促进小肠巨噬细胞吞噬中性红的能力 ∽0．01)；EPS几乎对小肠巨噬细胞生成NO的量无影响，只是很微量的增加了细胞上清液 中NO的含量，揭示EPS既能促进小肠巨噬细胞的吞噬中性红的量，又能使小肠巨噬细胞产 生微量的NO不会导致小肠炎症反应的发生，这对小肠内环境的稳定具有极其重要的作用。 结论：干酪乳杆菌EPS能促进小鼠单核巨噬细胞J774A．1增殖，双向调节腹腔巨噬细胞 的吞噬功能和分泌细胞因子的能力，促进小肠巨噬细胞的吞噬能力，改善炎症反应以