β-葡聚糖酶水紫花苜蓿制备纤维寡糖的研究.pdf

摘要 纤维寡糖作为功能性寡糖家族中重要的一员可应用于食品、饲料添加剂和生物农药等领域， 不仅能提高机体和植物免疫功能，还具有无毒、无污染、无残留、环境相容性好等优点，具有良 好的经济效益和社会效益。植物纤维素是自然界最丰富最廉价的可再生资源，是制备纤维寡糖理 想的原料。本实验选择苜蓿干草作为原料，对水解植物纤维素制备纤维寡糖的方法进行探索。主 要对纤维寡糖的分析检测、分离纯化以及酶解苜蓿制备纤维寡糖的工艺优化等几个方面展开研 究。 为了给后续反应的产物提供标准品和定性定量检测方法，首先需要制各单一聚合度纤维寡糖 的标准品并研究其检测方法。本文采用混酸降解法制备纤维寡糖，通过制备型硅胶柱分离纯化得 到四种单一组分，采用电喷雾飞行时间质谱确定其分子量，结果表明，四种组分分别为聚合度在 2—5的纤维寡糖。本试验一次上样300 mg纤维寡糖混合物，可分别获得28mg纤维二糖、43mg 纤维三糖、59 mg纤维四糖和52 和高压液相色谱(HPIC)等方法对纤维寡糖的定性及定量检测方法进行了探讨，检测结果表明， 不同聚合度的纤维寡糖在TLC和FACE上分离度较好，呈现不同迁移率的单一条带状。采用}形LC 谱峰，纤维三糖、纤维四糖和纤维五糖均出现两个色谱峰，且分子量相同，确认为同分异构体。 采用高剪切乳化结合稀碱液处理，并用双氧水脱色对苜蓿干草进行预处理，选择五种不同浓 度(0．5％、1％、2％、3％、4％)的碱液，通过饲料纤维的快速滤袋分析方法对处理后的苜蓿粗 粉进行分析。通过对比发现，1％的碱液为最适预处理浓度；采用HPLC定量检测预处理后的苜 蓿粗粉的成分结果表明其中纤维素含量为56．54％，半纤维素含量为9．22％。 以预处理后的苜蓿草粉为底物，采用B．葡聚糖酶进行酶解反应，制备纤维寡糖。选定酶解反 试验的方法优化酶解工艺。同时，得到了酶解反应的最佳工艺条件为：反应时间8h、反应温度 5．5、E／S为0．5。在该条件下降解苜蓿草粉生成纤维二糖的得率为6．75％，生成 50．O℃、反应pH 纤维三糖的得率为28．22％。 关键词：硅胶柱层析，分离纯化，纤维寡糖，单一聚合度纤维寡糖，苜蓿，p葡聚糖酶，制备 Abstract as is usedon a offunctional component mainly CeHo-oligosaccharidesignificant oligosaccharides animalsand foodfeedadditiveand not enhances effectivenessof plants， biopesticide．Itonly immunity it butcallalsobe totheenvironmentsinceisnon-toxicand celluloseisa friendly non-persistent．Plant in renewableresourcewhichaboundsthenaturewhatmakesitthedesirablelawmaterialof sativaischoseastherawmaterialinthis to the cello-oligosaccharide．Medicago experimentexplore methodof