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低温乳糖酶产生的分离鉴定及酶的提纯与特性研究.pdf
摘要
从新疆低温环境中筛选到一株可产低温乳糖酶的菌株14_1，利用形态学方法，生理生化实验、
16S
rDNA基因序列同源性比对及系统发育树构建对菌株进行鉴定，结果显示该菌属于水生拉恩氏菌
(Rahnellaaquaalis)，命名为Rahnellaaquatilissp．14．1。
对低温乳糖酶产生菌Rahnella
aquatilissp．1禾1进行了摇瓶条件下产低温乳糖酶的研究，确定了
mL三
摇瓶最佳发酵工艺：乳糖含量为2．5％，接种量3％，培养基初始pn为6．5，装液量为在500
mL。20℃，200f·min’1摇床培养48 U·mL．1。
角瓶装液体培养基100 h，14-1菌产低温乳糖酶活性4_51
Rahnella
aquatilisl4．1
sp．乳糖酶为胞内酶，将菌体用超声波破壁提取粗酶液，用硫酸铵分级沉淀，
Sephadex
果为电泳单条带，该酶的单亚基表观分子量约为60KDa。酶的纯化倍数为4．19，回收率25％。．
Rahnella
aquatilis
sp．14．1乳糖酶的酶学性质研究表明，以ONPG为底物，酶的最适反应温度为
35℃，对热敏感，45℃保温2
h，酶完全失去活力；最适反应pn值为6．5-7．0，在pn值低于5和高
Mgz+、Na+和C矛+对酶活力的影响f1／4,。
Rahnella h，乳糖水解率达到80％以上。
aquatilissp．14．1乳糖酶水解牛乳中的乳糖，35℃水解2
关键词：低温乳糖酶；水生拉恩氏菌；提纯；酶学性质
Abstract
its environmentin
One lactase strain14—1wasisolatedfromlow
cold—adaptedproducing temperature
XINJINAG was itscharacteristicsof
strainidentified
province．The bystudying
and and16SrDNA resultsshowedthatthestrain
physiologybiochemistry sequencealignment．The
toRahnella
belongs aquatilis．
Shake-flaskcultureconditionsof lactasewerestudiedwitll strainl4-1．The
cold—adapted psychrotrophic
fermentationconditionswere concentration inoculation
2．5％，initial6．5，seed
optimized：lactose pH
mLflask maximum 4．51
volume contained100mLmedium．TheB—Galactosidase
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