海蜇口腕部糖蛋理化性质及生物活性研究.pdf

海蜇口腕部糖蛋白理化性质及生物活性研究 摘要 escu]ehtumKishinouye)是一种大型的食用水母，在我国 海蜇(Rhopilema 有着广泛的资源分布，具有很高的经济价值、营养价值和药用价值。近代研究表 明海蜇有治疗高血压、慢性气管炎、哮喘、胃溃疡和单纯性甲状腺肿大等作用。 从海蜇的营养保健及药学功能来看，海蜇具有进一步开发和利用的价值。目前， 海蜇的一些化学成分及生物活性已经被研究探讨，如蛋白，毒素，多肽和糖胺聚 糖等，但关于海蜇口腕部糖蛋白的研究未见报道。 本论文以青岛附近黄海海域的新鲜海蜇为原料，采用现代的分离纯化技术， 仪器分析技术，药理研究技术和分子生物学技术，从海蜇口腕部分离纯化出一种 新的糖蛋白(JGP一Ⅲ)，并对其理化性质，清除自由基活性，免疫活性进行研究， 旨在为海蜇资源的迸一步开发提供理论依据和技术支持。实验主要获得如下研究 结果： l利用单因素实验和响应面分析方法中的Box-Behnken试验设计，对海蜇口 腕部糖蛋白的提取工艺进行优化，结果显示，糖蛋白提取的最佳工艺条件为：提 取溶剂为pH值为7．26的PBS，料液比为l：4，提取时间为7h。在此基础上。 进行超声辅助提取，提取的最佳工艺条件是：超声处理时间为15min，超声功率 为300W，提取时间60min。在此优化条件下，目标糖蛋白的得率为9．14％。 C-25阳离子交换柱层 2海蜇口腕部提取液经乙醇分级沉淀，SpSephadex 析初步分离，得到3组份，分别为JGP—II，JGP一Ⅲ，JGP一Ⅳ，选择糖和蛋白含 S300HR层析 量及活性较高的组分JGP一Ⅲ进行进一步研究。JGP-I]I经Sephacryl 柱， Sepharose SDS—PAGE电泳后，通过PAS和考马斯亮兰两种染色方法，在凝胶上相应的位置 出现了一条带。以上结果显示JGP-I]]是组成均～的糖蛋白，而不是糖和蛋白的 混合物。得率约为O．5％(占海蜇口腕部干基重)。 3JGP-III冻干粉是白色絮状粉末，易溶于水，不溶于乙醇、甲醇、丙酮等有 子量为109．7kDa，经HPLC测定，其分子量为85．3kDa，两种方法测定得到的分 IV 子量有一定差别。JGP一Ⅲ的Td值为31．6℃，Ts值为61．74℃。JGP一Ⅲ的单糖 组成主要有氨基葡萄糖，氨基半乳糖，葡萄糖，甘露糖，岩藻糖和鼠李糖。氨基 酸组成中甘氨酸含量最高，其次为缬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天门冬氨 酸等，缺乏色氨酸和组氨酸。JGP一Ⅲ经消除反应前后紫外吸收和氨基酸组成的变 化，说明JGP一1II中有o．连接糖苷键的存在。经糖肽酶F作用后，分子量发生明 结构特点。以上结果显示JGP-m是一种新的糖蛋白，这为JGP一Ⅲ的进一步研究 提供理论依据。 4试验通过化学发光的方法，检测JGP-III具有较强的清除羟自由基和超氧自 由基能力。JGP—III的由糖部分和蛋白部分共同参与清除自由基活动；在清除自由 基活动中，N一连接的寡糖链起到主要的作用；当温度达到热收缩温度61．74℃(即 蛋白纤维收缩到原来的1／3)时，清除自由基能力最强，说明JGP-IB清除自由基 活性与其空间三维结构有密切关系。 5采用JGP一Ⅲ溶液灌胃免疫低下模型小鼠，探讨了JGP一111免疫调节功能。 结果表明，不同剂量组的JGpⅢ均能提高小鼠脾指数及胸腺指数(PO．05)；显 全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能，从而提高机体免疫能力。 6用MTT法检测了JGP一Ⅲ对从小鼠的脾脏细胞中分离的淋巴细胞的增殖活性 的影响，结果发现，JGP-III可以促进小鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性，并且主要是 通过对T淋巴细胞群起作用的，而对B淋巴细胞几乎没有影响。JGP-III作用的最 p 佳浓度为50 T淋巴细胞的作用主要是作用于Thl亚细胞群。从细胞水平上揭示了JGP一Ⅲ免疫 调节作用的途径。 关键词：海蜇糖蛋白 ．理化性质 清除自由基免疫 V on i c