动态高压微射流术对脂肪酶活性与构象的影响.pdfVIP

摘要 摘要 脂肪酶因其广泛的应用而越来越受关注，其活性和稳定性的变化也是研究 的热点。而动态高压微射流技术作为一种处理方法应用于脂肪酶还鲜少研究。 本课题通过测定酶活、圆二色谱、紫外吸收光谱和巯基总量来研究动态高压微 射流技术对脂肪酶活性和构象的影响，并协同研究加入聚合物PEG和有机溶剂 异丙醇化学修饰对脂肪酶的影响，探讨脂肪酶活性与构象之间存在的关联性。 并首次尝试将DHPM处理应用于酶非水相催化之中。 以CRL为原料，研究DHPM处理对其活性及构象的影响。发现：DHPM 理下CRL活性升高，最高增加11．33％左右。而随着贮存时间的增加相对活性 先升高后降低，在贮存1h后，活性达到最高。经过8h后，处理酶均处于钝化 状态。DHPM处理对CRL二级结构有影响。D．折叠的含量变化趋势与CRL的 相对酶活的变化趋势相似，两者变化呈一定的正相关，而a．螺旋的变化呈现非 线性变化。DHPM处理使CRL的酶结构部分舒展，三维结构发生了变化。 通过DHPM协同化学修饰处理CRL，研究其活性和构象的变化。在CRL 缓冲体系中加入聚乙二醇，再经DHPM处理。结果显示：在PEG8000 4％(w／v) 后，发现其相对活性降低，而随着贮存时间的增长，CRL的酶活均有所提高。 对CRLTm值影响不显著，而PEG的加入导致紫外吸收强度发生变化。在 CRL缓冲体系中加入有机溶剂异丙醇，再经DHPM处理。结果显示：异丙醇在 20％。而这两种体系中，CRL13-折叠含量与酶活变化仍存在一定的正相关性。 因脂肪酶在非水相催化中的广泛应用，所以提高脂肪酶在非水相中的活 性，溶解性和稳定性就显得至关重要。DI--IPM处理正己烷体系中的CRL，结果 表明：CRL对油酸和月桂醇的催化合成率较高。DHPM处理后，CRL的相对酯 化活性发生改变。随着处理压力的增加，相对酯化活性先升高后降低，在 摘要 后的CRL在正己烷中的稳定性有所差异；虽然DHPM处理后，CRL酯化活性 变化不同，但是其热稳定性变化趋势相同，变化不显著。 关键词：动态高压微射流；脂肪酶；活性；构象；圆二色谱 II Abstract ABSTRACT moreandmoreattentionsbecauseofits of Lipasecaught widelyuse．Changes and arethe the wag activitystability hotspot．Butdynamichigh—pressuretechnology inresearch．Ourthesisfocuses and seldomused 011 of lipaseactivity changes conformationduetodifferenttreatments．nleeffectofDHPMonthe of activity WaSstudied thedeterminationof through enzymeactivity,CD lipase spectra,UV sectionandSHam