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DOM存在下水体中氧化铜纳米颗粒的抑菌机制 DOM存在下水体中氧化铜纳米颗粒的抑菌机制 摘 要 随着纳米技术的发展，纳米材料被广泛应用于医药、化妆品、涂料、染料、 光电设备、水处理、空气净化等方面。纳米材料在应用、运输、处置的过程中， 势必会导致纳米材料随着大气沉降、地表径流、地下渗漏等途径进入环境，尤其 是水体环境。虽然人工纳米颗粒(酚岬s)的毒性效应以及潜在环境风险还存在 诸多争议，但已有研究表明，由于纳米颗粒的小粒径、大比表面积、量子尺寸效 应以及宏观量子隧道效应等特殊的性质，更容易与动物、植物、微生物、细胞等 生物体接触，在生物体内积累富集，导致生物毒性。微生物处于食物链的最底端， 是最主要的分解者，被广泛的应用于食品、药品、水质净化以及环境污染指示生 物等。研究ENPs对微生物的毒性效应，可以为真核生物的纳米安全性研究提供 理论依据。如今，ENPs对微生物的毒性研究大多都是在蒸馏水配制的培养基中 进行的。由于纳米材料在自然水体中受pH、离子强度、可溶性有机质(DOM) 等水化学条件的影响，ENPs的团聚、吸附等性质发生变化，对生物的毒性也会 发生变化。本研究拟通过研究水体中DOM影响下的ENPs抑菌效应，深入探讨 在自然水体中，ENPs的抑菌机制。 ENPs的水力半径小于微米氧化铜粒径，但表面积远大于微米氧化铜。SRFA 导致CuOENPs电负性增强，水力半径增大。SRFA吸附到CuOENPs表面，使 其表面功能性集团吸收峰增强。 ENPs在去离子水配制培养基中的抑菌效应研究表明，纳米氧化铜颗粒(CuO ENPs，10 h时10L以的CuO rim)显著抑制大肠杆菌的生长，2 mg ENPs抑菌率 为49．95％，抑菌率显著大于大颗粒氧化铜颗粒(1．5岬)，且抑菌率随着时间与 浓度的增大而增大。因此，选用10 L_的CuOENPs在2h条件下对细菌的毒 mg 性作用作为下一步毒性机制实验条件。 通过TEM、SEM直观的观察到CuOENPs明显破坏细胞膜完整性。由于 TEM、SEM具有随机性的特点，进一步通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪， 利用PI和DAPI染色，证实了CuOENPs破坏了细胞膜的完整性。K+含量作为 细胞膜稳定性的指标，检测到CuOENPs导致K+渗透量升高。同时，TEM、SEM 观察到CuOENPs进入到细胞内部，势必会对细胞的生理代谢产生影响。进一步 D011存在下水体中氧化铜纳米颗粒的抑菌机制 ENPs 研究发现CuOENPs导致细胞总蛋白质含量下降，总DNA含量升高。CuO 未对细胞产生氧化损伤。 自然水体中CuOENPs对大肠杆菌抑制率有所下降。富里酸(SⅪ认)作为 典型DOM，用来研究DOM在自然水体抑菌中的作用，当SRFA被添加于去离 子水培养基后，CuOENPs对大肠杆菌的抑菌率降低。通过SEM发现，SRFA影 响下，细菌细胞膜表面变紧致，CuOENPs对细胞膜破坏程度减轻，K+渗透量降 低。SRFA主要通过吸附在细胞膜表面，形成“物理屏障，减轻CuOENPs对细 菌细胞膜的损伤，同时也减缓了细菌蛋白质、DNA的损伤，从而降低其毒性。 关键词：DOM：抑菌率；细胞膜；大肠杆菌：纳米颗粒 Ⅱ DOM存在下水体中氧化铜纳米颗粒的抑菌机制 I aI UUUCuOkN n T。l antantiI bacter。IbaCtemechan‘smi11ecManI sillofo ENPsiI theMePresence ofDOM Abstract Wjtllthe of wereusedin