仿生界面上生物子的电子传递和荧光光谱电化学.pdf

摘 要 生物分子间的电子传递反应是生物体发挥其生物功能的一类重要的化学反应过 程。电化学方法特别是表面电化学方法作为一种快速、简便、低能耗而且具有较高灵 敏度的实时原位方法，被用于研究生物分子的电子传递过程，不仅可以测定其基本的 热力学和动力学参数，而且可以揭示生物体系中电子转移机理，对于理解生命活动及 制备电化学生物传感器等具有重要意义。 脱氧核糖核酸（DNA ）作为生命体的基本遗传物质，它的研究带动了20世纪生 命科学的发展。利用DNA修饰电极研究DNA与其它分子的相互作用得到广泛的研究 和应用。上世纪末出现的碳纳米管（CNTs ）等纳米材料，由于其独特的电子传递特 性和生物相溶性，在电化学传感器研究领域引起了人们的极大兴趣。 然而，常规的电化学方法具有统计平均的性质，不能满足分子水平检测的需求。 分子荧光光谱技术由于其较高的灵敏度、能提供多种物理参数等优点，它和电化学技 术相结合，大大促进了从分子水平对生物分子的结构和功能进行研究，引起越来越多 的关注。多光子激发荧光技术是最新光子学技术（飞秒红外激光技术等）与高灵敏探 测技术结合发展来的，它克服了单光子激发存在的光损伤、光漂白等缺点，而且单一 波段的激光可以同时激发多种分子，为生物医学研究提供一种多参数的研究手段。将 多光子激发荧光技术与电化学调制技术有机地结合起来，用于仿生界面上生物分子电 子传递动态过程的高灵敏度的实时研究，对生物分子中的能量传递与电子传递研究具 有非常重要的科学意义和实际价值。 鉴于此，本论文利用 DNA 和 CNTs 作为修饰材料，采用简便的干燥吸附法制备 修饰电极，采用电化学方法对不同生物分子的电化学行为进行了探讨。主要研究内容 和结果如下： （1）采用循环伏安（CV ）技术和差分脉冲伏安（DPV ）技术在金电极和玻碳（GC ） 电极上对细胞色素c （Cyt c ）与dsDNA和ssDNA的相互作用进行了研究。结果表明， Cyt c均能与DNA通过静电效应发生较强的相互作用。在GC 电极上，Cyt c与dsDNA 的 结合常数kds 为(1.69±0.38)×105 L mol-1 ，与ssDNA 的结合常数kss 为(3.35±0.50)×105 L mol-1 ，每个Cyt c与 3.3 个dsDNA碱基对结合，与 4.0 个ssDNA碱基结合。本研究为利 用电化学方法研究DNA和蛋白质的相互作用提供了一种有效的方法。 （2 ）纳米材料的尺寸效应在化学、物理等领域都有着广泛而深刻的研究。本文 I 采用循环伏安（CV ）技术研究了基于多壁碳纳米管（MWNTs ）的纳米界面上和普通 界面上dsDNA与Co(phen)33+/2+ 的相互作用，结果表明，在MWNTs纳米界面上，dsDNA 与Co(phen)32+ 的相互作用比在常规大尺度界面上的相互作用显著增强。在MWNTs 的 2+ 4 -1 纳米界面上，Co(phen) 与dsDNA 的结合常数为k = （2.53±0.22 ）×10 L mol ，比在 3 2 大尺度界面上的结合常数k = （1.68±0.15）×104 L mol-1 明显增大；Co(phen) 2+在大尺 1 3 度电极表面与DNA 的解离速度常数为0.16 min-1 ，也远远大于在纳米界面上从DNA解 离的速度常数 0.0025 min-1 。 （3 ）采用循环伏安技术在CNTs 纳米界面上对 SOD 的电化学行为和生物催化活 性进行了研究。结果表明： SOD作为一种氧化还原蛋白质，与常规电极相比，在纳米级界面CNTs上可以进 行快速的电子传递过程，实验具有较好的重复性。在 100 mM pH5.9 的Tris-HCl空白 溶液中测得：SOD与CNT之间的电子传递为一单电子单质子传递过程，式电势（E° ΄）