单个活细胞的图分析技术和应用研究.pdfVIP

摘 要 f ， f细胞是生物体和生命活动的基本单位。1665年，RobertHooke首先发现细 胞结构，将人类的认知视野带入细胞这个前所未知的微观世界。现在，人们己不 仅仅满足于在“死”的状态下研究细胞的结构和组成，而且已经刀：始在“活”的 状态下研究细胞的功能和生命活动现象。细胞的新陈代谢、呼吸作用、光合作用、 信息传递、跨膜运输等都与细胞“活”的状态有关。研究细胞“活”的’性质是研 究生命活动规律和本质的关键所在。因此，单个活细胞的检测与分析已成为生命 科学中的一个研究热点。∥ 作为国家自然科学基金重点项目(单个活细胞动态图像技术及实时无损活体 和指导下，我们紧紧抓住单个活细胞检测和分析的内在要求．研究设计了高性能 数字荧光显微系统；建立了相对较为完整的显微图像分析方法：并以此为基础， 在国内较早地开展了有关细胞生物学实验研究。总之，针对本课题的跨学科性要 求，我们在实验设备与手段的研究、细胞生物学实验两方面均做了大量工作，其 主要内容有： 1、高性能数字荧光显微图像系统的研制 f综合运用光电检测技术、计算机技术、图像处理与识别技术，研究设计了高 数据精度(12Bit)、强致冷效果(可达零下20℃)等优点，而且利用这套系统特 有的Binning技术和图像空间分辨率恢复技术，还能进一步改善图像的时．空分辨 率。根据微粒光斑强度分布特征，本系统还能实现对光斑细节的亚像素级分辨。y ’ 2、专用图像处理技术研究 ／为满足有关细胞生物学实验的特殊要求，我们将图像处理技术和实际需要有 效地结合起来．找到了独立性强、均匀性好、适用于彩色图像处理的颜色空间； 提出了符合人眼视觉特征的图像增强方法；在认真研究图像恢复技术的基础上， 找到了运动模糊图像和厚试样模糊图像的恢复方法。P。 3、SPT技术研究及LDL受体运动能力的检测 f Particle SPT(Single Tracking)技术与荧光漂白后恢复技术相比，具有分辨 率高，能够给出单个微粒运动类型等明显优点。我们在进一步发展和完善SPT 技术的基础上，提出了适合实验要求的SPT算法，并在国内较早地开展了LDL (Low Density Lipoprotein)受体运动能力检测研究。在实验中我们观测到了定 向运动、区域限制运动、不规则扩散运动、自由扩散运动和运动类型的转换等一 些重要的结果。与此同时，我们还用蒙特卡罗方法对LDL受体在细胞膜上的运 动进行了计算机模拟。通过对实验结果和蒙特卡罗模拟结果的分析，我们提出了 控制和影响LDL受体运动的“主观调控和客观限制相互作用”新假说，从细胞系 统的角度阐明了控制和影响LDL受体运动的机制。1／ 4、基于B样条的“融合荧光”三维重建算法及应用研究 f通过对现有三维重建算法的研究和比较，我们提出了适合半透明生物体试样 荧光图像三维重建的快速算法——基于B样条的“融合荧光”算法，实践证明， 它具有重建速度快、图像效果好等明显优点。以此算法为基础，利用共焦显微镜， 我们研究了脉冲电场刺激下鸡胍小脯粒细胞内游离c。”的i爿i：分竹晰j况，得到了 细胞内游离cP三维分布图，从而阐明了脉冲电场对鸡助!小脑粒细胞游离c。” 分布的影响，为进一步研究细胞内游离c■的调控以及对外界刺激的反应扣F了 鼬}魑础。)／ 总而吉1之，我们根据课题工作具有跨学科性这个特点，建立了较为完整的单 个活细胞图像检测分析方法，研制了高性能数字荧光显微系统，并率先在国内丌 展了有关细胞生物学实验研究，在实验手段和实验本身两方面均取得了一定的创 新和突破。 关键词： 单个活细胞，数字荧光显微图像系统，图像处理．单粒子追踪．LDL受体 三维重建 ABSTRACT viewwasintroduced life human of and activities．The CelIis