力学刺激对绝经骨质疏松大鼠成骨细胞作用的细胞分子基础.pdf

四川大学博士学往论丈— 中丈摘要 力学刺激对绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞 作用的细胞分子基础 生物医学工程 专业 研究生:李良 指导教师:陈槐抑 骨质疏松 ((osteoporosis)是以骨量减少，骨组织微观结构退化，致使骨 脆性增加以及易于发生骨折为特征的一种全身性骨骼系统疾病。骨质疏松的主 要危害是其并发症-一 骨折。长期以来已经认识到力学因素在骨质疏松的发生 发展过程中具有重要的作用;除了医学治疗以外，预防和治疗骨质疏松的重要 因素，就是运动。研究表明，对于绝经后妇女，体育锻炼和增加活动，有助于 维持骨矿密度，降低骨质疏松的危险。在体内，力学负荷可以抑制骨吸收，增 加骨形成，骨细胞可以将力学信号转变成细胞生物化学合成反应。但是，这种 力学信号传导的机制仍不清楚。 本文的目的就是:1)探讨周期性双轴力学应变对体外培养的成骨细胞增 殖、分化与合成功能的影响;2)探讨周期性双轴力学应变对体外培养的成骨 细胞膜表面integrina;、0:、0。表达的影响和integrina:、0;、0,mRNA 表达的变化。3)探讨 integrina:、0:、0。表达量变化与成骨细胞增殖和 功能活性间可能的相关关系;力学信号转变为成骨细胞细胞增殖与生物合成反 应可能的机制。选用3月龄和6月龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠，采用双 侧卵巢切除术，建立骨质疏松模型。实验分成4组:3月对照组 (3control), 3月卵巢切除组(3ovx),6月对照组 (6control),6月卵巢切除组(6ovx)。分 别从各组大鼠颅顶骨分离成骨细胞，在含10%胎牛血清的F-12培养液中分别培 养成骨细胞，并接种在周期性双轴力学应变装置 (Flexercell)中。这种周期 性双轴力学应变装置，可以提供一个基本均匀的应变场，使在硅橡胶膜上生长 的成骨细胞受到一个基本相同的应变作用。当细胞生长至亚融合状态 (Sub- 力孕刹激对绝经后甘质从松大民成骨细胞作用的细胞分子基抽 — 李良 confluence)，给细胞施加力学刺激，频率为1Hz，力学刺激分别为400,1000, 4-000，strain:作用时间分别为每天30min,2,4,8h，共加载两天。以 未受力学刺激的细胞为对照组，受力学刺激的细胞为实验组，并进行比较。采 用流式细胞技术测定integrin。:，0，，0a在成骨细胞膜上的表达量、细胞 周期分布与细胞增殖变化;采用同位素标记方法检测成骨细胞骨钙素、I型前 胶原C端前肤 (PICP)和总蛋白的分泌量;采用鬼笔环肤染色肌动蛋白 (F-actin)，在荧光共聚焦显微镜下观察细胞骨架结构的变化。结果表明:1) 3ovx组和6ovx组大鼠切除卵巢3月后，雌激素分泌量降低，骨量减少，骨力 学性能下降，表现出与妇女绝经后相似的高骨转换率骨质疏松。2)在静态培 养条件下，从各组大鼠分离的颅顶骨成骨细胞均有integrina2,00a蛋 白水平的表达，其中0:表达量最高。6ovx组成骨细胞integrina2,0，的表 达量明显降低:其余各组间无明显差异.3)在静态培养条件下，3ovx组和6ovx 组大鼠成骨细胞增殖活性明显增高，这与绝经后骨质疏松骨代谢的高转换率相 一致。4)3control组成骨细胞对力学刺激AY敏感，较小的力学应变 (400 “ strain)作用就可上调integrina2,0，、0。的表达量，促进成骨细胞合成骨 基质的能力增加，促进成骨细胞的增殖、分化。在1000t,strain力学刺激下， 3control组成骨细胞integrina2,00:的表达量出现明显上调，成骨细 胞合成骨基质的能力增加也最为明显。在4000ustrain力学刺激下，3control 组成骨细胞integrina:，0，，0。的表达量进一步增高，对3control组成骨 细胞的作用主要是增加成骨细胞的增殖活性，抑制成骨细胞的分化成熟。5) 6control组成骨细胞对力学刺激的敏感性低于 3control组成骨细胞。 在 10001strain力学刺激下，成骨细胞integrina2,0,0，的表达量出现上 调:在4000ustrain力学刺激下，成骨细胞integrina。，0，，0，的表达量 明显上调，成骨细胞合成骨基质的能力与增殖活性增加。但力学刺激对 6control组成