利用米糠谷氨酸羧酶富集γ-氨基丁酸及其分离与纯化.pdfVIP

摘要 摘要 米糠是稻谷加工中的剐产品，年产量很大但丌发利用程度很低，其含有的谷氨酸脱 发生脱羧反应来富集丫．氨基丁酸(GABA)。 设计两种工艺条件分别模拟不同的植物逆境条件激活米糠GAD，其中：直接法模 拟热刺激、缺氧、盐胁迫等逆境条件；提酶法模拟热刺激、缺氧、盐胁迫、机械刺激等 逆境条件，并在此基础上对富集液中GABA的分离纯化工艺进行了探讨。具体内容包 括：米糠直接法和提酶法富集GABA工艺条件的比较；利用固定化酶法固定化米糠GAD 制备GABA；分离纯化GABA富集液中的GABA。 研究对比了利用米糠通过直接法和提酶法富集GABA的两种工艺，优化了两种方 的激活作用最强。 借鉴固定化酶的方法，尝试利用健康无毒的海藻酸钠固定化米糠GAD制备GABA， 得到最佳固定化条件：米糠用量6．0％、海藻酸钠溶液浓度2．5％、硬化时间lh、CaCl2 溶液浓度1．O％。通过固定化米糠GAD酶学性质的研究，发现经海藻酸钠固定化的米糠 高。 利用乙醇沉淀法对GABA富集液进行初步分离处理，得到75％的乙醇浓度对GABA 富集液中蛋白质和多糖的沉淀效果显著，沉淀率达到90％以上，且GABA的损失率较 小，表明乙醇沉淀法适用于GABA富集液的初步分离。LSA．8B大孔吸附树脂是一种高 效、选择性吸附纯化树脂，对蛋白质、糖和色素有较好的吸附，且GABA回收率较高， 适用于GABA富集液的纯化。吸附纯化过程为吸热过程，主要表现为物理吸附，反应 温度升高有利于加速吸附进程。研究考察了吸附过程中的影响因素，确定最佳条件为： 采用预处理液调pH值至5．0，上柱流速为2BV·h～，以脱除蛋白质、色素和部分多糖等 杂质；流出液调pH值至8．0，上柱流速为1BV·h～，脱除糖等杂质。 碱性乙醇再生剂结合了酸碱再生剂和乙醇再生剂的优点，对LSA．8B大孑L吸附树脂 到4．04％，GABA回收率为98．06％。 关键词：Y．氨基丁酸谷氨酸脱羧酶米糠 固定化酶大孔吸附树脂富集纯 化 Abstract Abstract rice Ricebranisa of annual but low by—productprocessing，withhigh yield very andutilizationlevel．The ofGlutamate development enzymeactivity ricebranisoneofthe allkindsof onthe of highestamong plants．Basedenzymaticproperties GAD studiedtheaccumulation inrice bran，thispaper of丫-aminobutyricacid(GABA) ricebranGAD． through rice InordertoactivatebranGAD，two conditionswere tosimulate process designed differentadverseconditions：thedirectmethodsimulatedadverseconditionssuchas plant andsalt extractedmethodsimulatedadverse thermal stress；the stimulation，hypoxia enzyme con