茶树体内茶氨酸谢及其相关酶的基础方法研究.pdf

安徽农业大学博}：论文 中文摘要 摘 要 Y在绿茶 L．茶氨酸是茶树体内特征性非蛋白质氨基酸，自1950年日本学者Sakato 提取液中发现并鉴定以来，人们对茶氨酸的理化性质、代谢途径、分离纯化、合成方 法、分析检测、生物学活性及食品应用等诸多方面开展了广泛而深入的系统研究。为 进一步揭示茶树体内茶氨酸代谢规律及生理意义，阐明各茶氨酸代谢关键酶在茶树体 内的催化本质，本课题进行了茶氨酸代谢及其相关酶的基础方法研究：(1)分析了茶氨 儿茶素类、嘌呤碱类及游离氨基酸的分布规律，从而为茶氨酸代谢酶研究提供选材依 据；(3)比较了不同氮素前体和黄化处理对茶籽苗儿茶素类及茶氨酸的代谢效应；(4)建 立了一种茶叶游离氨基酸定量新方法一DNFB衍生化法；(5)实现了茶树体内茶氨酸代 方法，探讨了茶树体内茶氨酸合成酶活性HPLC检测方法的可行性；(7)开展了茶树体 内茶氨酸代谢物及其代谢酶的初步研究。 本论文主要获得如下试验结果： 立了茶叶中未衍生化L．茶氨酸的分析方法。结果表明：【厂茶氨酸的紫外吸收波长范围 标回收率为99．21‰101．28％。 部位儿茶素类、嘌呤碱、氨基酸(茶氨酸)进行分析测定。结果表明：儿茶素类、嘌 呤碱(咖啡碱、可可碱)主要分布于茶籽苗叶片及嫩茎，子叶下部含量明显降低；EGCG、 茶氨酸在茶籽苗嫩叶中含量较高，并随叶片成熟不断减少，但茶氨酸以侧根和丰根最 为富集，其代谢前体氨基酸(Glu、Ala)在根部亦具较高含量。随着茶籽萌发，茶氨 酸在胚根大量合成，初露紫红色嫩茎的茶籽苗根系茶氨酸含量达13．429mg／g鲜重。据 此认为培育茶籽及其无性系幼苗，并以幼嫩根系为材料，有望成为茶籽综合利用及天 然茶氨酸获取的新途径。 3．以生育一致的去子叶福鼎大白茶籽苗及其非完整植株为材料，采用含不同氮素 安徽农业大学博}：论文 中文摘要 子叶上部是儿茶素代谢丰要场所，不同氮素前体培养的茶苗植株子叶上部没食子化儿 养2d和4d的茶籽苗子叶上部儿茶素组成及总量均发生或高或低的增减变化，完整植 株儿茶素含量略高于非完整植株，但其培育过程中均呈减少趋势。(2)茶苗植株的予叶 下部茶氨酸含量显著高于子叶上部；不同氮素前体培养2d或4d的完整植株子叶上部 茶氨酸含量差异均低于非完整植株，而子叶下部则表现为完整植株高于非完整植株； 茶籽苗完整植株培养4d后，其子叶上部茶氨酸含量显著低于培养2d的茶籽苗植株。 自然光照和黄化处理的茶籽苗植株子叶下部L．茶氨酸含量并无太大差异：黄化处理可 提高子叶上部L．茶氨酸的含量，但并不伴随子叶上部儿茶素总量的降低。 4．氨基酸的a．氨基能与2，4．二硝基氟苯(DNFB)发牛衍牛化反应，本试验通过乙 立了一套茶叶游离氨基酸定量新方法。该法对不同茶类分析结果与茚三酮显色法基本 0．2mol／L 茶样浸提液，1．0mL NaHC03，1．0mL1％(V～)DNFB一二氧六环溶液，充分 lmol／L 混匀后，于60℃水浴加热，暗处密闭反应40min，加入0．5mLHCl终止反应。 在该反应条件下，红茶、绿茶、乌龙茶、黄茶、白茶和黑茶的平均加标回收率和相对 98．947％-,101．840％和0．500％-1．271％(L一谷氨酸)。 5．L广丙氨酸、乙胺、L．谷氨酸及L．茶氨酸是茶树体内茶氨酸代谢途径的主要前体 或产物，其在茶树体内的分布及变化和参与其代谢的相关酶类紧密联系。本试验以2，4． 代谢物进行了分析测定，结果表明：L广丙氨酸、乙胺(盐酸乙胺)、L．谷氨酸及L．茶氨 与衍生化产物的吸收峰面积具有良好的线性关系(L=360nm)；该法适用于成品茶及 茶树鲜组织中茶氨酸代谢前体及产物的同步检测，并可获得准确可靠的分析结果。六 大茶类各待测组分以白茶、绿茶、红茶中的L．茶氨酸含量相对较高，而在黑茶中仪检 出少量乙胺；L丙氨酸、L．谷氨酸和L．茶氨酸在茶籽苗中的含量及分布具有明显的季 节性变化，但乙胺在茶树根系及芽叶均保持在含量