柑橘雄性不育资线粒体dna的遗传多型性研究.pdfVIP

’仁中农业^学2003届博．j‘论文 攘 要 其丰富。在柑橘类果树中，雄性不育的品种，类型在生产和育种中具有举足轻蘸的地位。 本研究系统地搜集了60余份柑橘雄性不育、低育及带有胞质雄性不肖基因的种质，以 几个起源较吉老的雄饿可育类鍪为对照，运用不同的分子标记，对线粒体和吁绿俸DNA 的遗传多型性进行研究，以探明柑橘雄性不育釉质胞质DNA是否具有遗传多型性，以及 结合研究了棱ONA水平上的遗传多样稳。温州蜜稽是竟瘦撑橘炎懿重簧品穗，两虽细臆 质雄性不育，通过温州蜜柑及其有亲缘关系的品种核基因组和细胞器基因组的分析，探 讨了温娜蜜聿鼙不育臆痰萋因缝及棱基鬻缢豹起潆阀蘧。主要磷究结莱如下： 1．分别采用AFLP、SSR标记分析了16个温州蜜横栽培品种与早橘、梗橘、黄岩本 地旱、本地广橘总DNA及核纂豳组之闯的差异，聚类分析表明本地广橘与温州蜜寿旨有紧 密的亲缘关系，而与早橘、棱橘、黄崧本地早的亲缘关系较远。但在胞质水平上本地广 稀与温州蜜稚差异明显。17对酶／线载体探针缀合中的13对(76．5％)发现本地广橘与 温州蜜柑在线粒体上的差异。rbcL／Bat棚l、拍吐／＆旅I等组台也检测到两者之间叶绿 体DNA的遗传交异。稔质与核DNA静诞据表明滠瓣蜜稽和本圭龟广橘筠为杂种越源，推测 它们分别为橘与甜橙_难交与反交的姐妹系。温州蜜柑台有橘的胞质，本地广橘具有甜橙 盼胞质。壶予两者核蒸因组差异甚镞，嚣胞质基因缰麓异显蔫，尤其是线粒体DNA丰 富的多态性，因此推测是线粒体基因的差异导致了花粉育性的改变。 特异扩臻本通广橇、溢娟蜜程蓍痰l号cob萋函的缣守痔硝，英核苷酸霸爨墓酸与 拟南芥等cob的同源性很高。本地广橘与国庆l号cob基因核苷酸相似性为96．7％，氨 基酸弱滚栏舞88+6％。 线粒体探针Northern杂交结果表明在本地广橘叶片和温州蜜柑(国庆1号)表达 东平上没有差异，但arp6．cob、∞班捡测到滋热蜜柑(国庆i号)幼嫩时片与花药 表达量上的差异，花药转录物表达丰威降低，可能与温州蜜柑线粒体基因时空袭达有关。 遗妫蜜糕务羧培熬耱之阕遗终上燕发一致，AFLP檬记钗捡溺出三个晶耪建张、惑 柑4号、国庆l号有多样性。 2．调查了郝分柑橘雄往不育资源筏耪蠹毒育性，花粉萌发率、花耪染色活力为零或缀 低，导致花粉败育。35对线孝立体探针／酶组合用于检测柑橘雄性不育资源限制性片段长 出60份柑橘雄性不育、带有胞质雄性不育基因的种质依据其线粒体基因组结构的不同 传距离较远(0．68—0．?9)。mt(II)胞质类型内的遗传躐离(0．105)高。 Pscl是与甲基化敏感的内切酶，纽荷尔脐橙Pstl消化盛DNA的线黢落探针 柑橘雄性不育资源线粒体DNA的遗传多型性研究 生了甲基化。 依据叶绿体RFLPs也可以将柑橘的胞质类型分为4组，柑橘叶绿体的多态性主要集 中在柏以基因，与线粒体DNARFLP的分类结果是一致的。叶绿体型cp(I)与其它三 类叶绿体型遗传距离较远(0．58—0．97)。线粒体与叶绿体DNA具有很高的相关性， r=O．86。但胞质DNA与核SSR标记的相关系数低。 3．建立了柑橘线粒体DNA提取的完整体系。以柑橘胚性愈伤组织为试材，不连续蔗 糖梯度超速离心法纯化线粒体，提取的线粒体完整，具很强的荧光活性。mtDNA片段在 rRNA Southern 20Kb左右，且无降解。叶绿体探针rubJscoL、核探针45s blotting没 有检测到叶绿体DNA与核DNA，而线粒体探针印施获得一条5kb大小的杂交带，说明 不能鉴别的柑橘品种。 4．华农红心柚mtDNA带型不同于柚葡萄柚亚组带型，与甜橙亚组的带型一致。甜 橙可能为其母本，结合SSR分析，推测是甜橙与柚的杂种。胡柚有柚胞质RFLP带型， 甜橙的SSR谱带，推测可能是柚与甜橙的杂交种。 关键词：柑橘，雄性不育，线粒体DNA，叶绿体DNA，RFLP，RAPD，SSR 华中农业大学2003届博士论文