棉花转gst基恢复系恢复力提高机理的研究.pdfVIP

摘要 棉花具有十分明显的杂种优势，种植杂交棉是提高棉花产量和品质的有效途径之一。目 前棉花杂种种子主要是通过“人工去雄授粉法”获得，制种成本高，效率低，有碍棉花杂种 Male 优势的利用。棉花细胞质雄性不育(Cytoplasmic Sterility，CMS)植株自身不能产生 有生活力的花粉，而雌蕊正常可育。利用棉花细胞质雄性不育的“三系”和蜜蜂传粉的制种 法，可省去人工“去雄”和“授粉”，从而大大降低棉花杂种种子的生产成本，在棉花杂种优 势利用中具有重要价值。早在二十世纪70年代，美国的Meyer(1973)己育成具有哈克尼西棉 (矗harknessii Br∞degee)细胞质的雄性不育系，并实现了“三系”配套，但因其恢复 系“DES—HAF277”的恢复力不够强，故在生产上一直未被利用。王学德用转基因技术将谷肮 甘肽S转移酶(Glutathione 入到恢复系中，培育出了一个强恢复系——“浙大强恢”。与受体恢复系“DES—HAF277”相 比，“浙大强恢”对不育系的恢复力提高了25，8％，解决了棉花细胞质雄性不育“三系”中 恢复系对不育系育性恢复力不够强的问题，从而使通过“三系法”制种大面积利用棉花杂种 优势成为可能，故在生产上有广阔的应用前景。但棉花转GST基因恢复系恢复力提高的具体 机理并不清楚。 为此，本文以哈克尼西棉细胞质不育系和保持系为对照，以转基因恢复系“浙大强恢” 所配F，和受体恢复系“DES—HhF277”所配F1为材料，通过田闰考察和比较试验，研究外源GST 基因parB对杂种F-花药、胚珠、产量和品质性状的效应；通过石蜡切片光学显微镜观察和超 薄切片电子显微镜观察，研究外灏GST基因Barb对杂种F，花药显微和超微结构的影响；通过 生化分析，研究外源GST基因parB对杂种F，花药及其线粒体呼吸和活性氧代谢的影响：采用 实时荧光相对定量PcR的方法，研究外源GST基因parB在杂种F。的转录情况及其与GST酶活性 的关系。研究主要结果如下： 哈克尼西棉细胞质雄性不育系花药及其线粒体oz的产生速率明显高于正常，远远超出活 性氧清除体系的清除能力，从而引起大量的活性氧积累，造成氧应激，使雄性细胞及其线粒 体发生严重的膜脂过氧化。进而造残雄性细胞的退化。反映在细胞形态学上，造孢细胞增殖 期，不育系雄性细胞线粒体最先出现异常，表现为部分线粒体出现肿胀、内嵴开始模糊、基 质变淡；接着，它们的细胞质开始收缩，细胞膜局部与细胞壁分离，细胞质内核糖体密度下 降；随着肿胀线粒体数目的增加和线粒体肿胀程度的加深，雄性细胞的液泡膜出现破裂，液 泡对细胞质及其中的细胞器进行自吞噬，染色质发生凝缩，内质网膨大；然后，雄性细胞整 个结构被破坏，细胞质和细胞核逐渐解体、消失。这些败育的超微结构，同文献报道的活性 氧诱导的植物细胞程序性死亡的超微结构十分相似。所咀认为，哈克尼西棉细胞质雄性不育 系雄性细胞的败育是～个由过量活性氧诱导的细胞程序性死亡的过程。 受体恢复系“DES—HAF277”所iEF，的花药及其线粒体02的产生速率较不育系低，抗氰呼 吸较不育系高，但由于其恢复力不够强．与保持系相比，0。的产生速率仍较高，抗氰呼吸仍 较低。在减数分裂期和小孢子单核期，由于雄性细胞中线粒体数量迅猛增加，受体恢复系 “DES～HAF277”所配Ft部分雄性细胞活性氧的产生总量仍超出活性氧清除体系的清除能力， 所以花药及其线粒体仍有较多的活性氧积累和较严重的膜脂过氧化，从而使部分雄性细胞从 减数分裂开始出现败育，造成可育花粉率低，结铃率低，不孕籽粒高，杂种优势不明显。 外源GST基因parB,在“浙大强恢”所配F．植株(特别是花药)中有很高的转录水平，平均 达的协同作用下，在造孢细胞增殖期、减数分裂期、小孢子单核期和成熟花粉粒时期，与受 体恢复系“DES—HAF277”所配F。相比，“浙大强恢”所配F-花药线粒体中GST酶活性分别提高 GST酶活性的提高，很好地保护了“浙大强恢”所配Ft花药及其线粒体中的活性氧防御系统， 使其银好地运行，从而使花药及其线粒体中的活性氧得以很好地清除，防止活性氧的积累， 保护了线粒体和雄性细胞，进而使“浙大强恢”所配Fl／J、孢子的发生和雄配子的形成均正常， 能产生大量壁结构完整、细胞质浓厚、细胞器丰富、积累大量淀