红茶菌优势微生的分离、鉴定及抗菌机理的研究.pdfVIP

红茶菌优势微生物的分离、鉴定及 抗菌机理的研究 摘要 红茶菌发酵液是一种由酵母菌、乳酸菌、醋酸菌等多种微生物发酵而成的一种传统 酸性茶饮料。其发酵液中含有多种营养因子，包括茶叶中一些营养成分、活的微生物细 胞及其代谢产物。红茶苗来源不同，微生物种类差异很大。本论文对红茶菌优势微生物 的分离鉴定、抗菌微生物的筛选、发酵液中蛋白质分析条件优化，培养过程中菌相及发 酵液中的物质变化及其抑菌机理进行了研究。 主要研究结果如下： 1从红茶菌中分离了3类共12株微生物 (彳．metha nolica)，4株酵母菌包括克鲁丝假丝酵母(CandidaKruseO，汉逊德巴利酵母 Linder)，酿酒酵 (Debaryomyceshansenii)，栗酒裂殖酵母(Schizosaccharomycesprombe 母(Saccharomyces P)。 cerivisiae)，乳酸菌LA(Lactobacillus nolica)为首次发现。 其中重氮营养醋杆菌(Adiazot-rophicus)、甲醇醋杆菌(4．metha 2培养过程中菌相处于动态变化中 在培养过程中发现，红茶菌发酵波每毫升的微生物数量比每克菌膜中多。培养至第6d， 发酵液中的醋酸菌的数量比菌膜中的数量高出7倍；酵母菌的数量高2倍。在培养过程中 醋酸菌和酵母菌的生长曲线相似。发酵液中的乳酸菌数量比酵母菌和醋酸菌低，其对数生 长期在培养后的第6d～8d，比醋酸菌、酵母菌慢锝多。培养时间长短不同，菌的数量存在 差异。 从红茶菌中分离出的醋酸菌和酵母菌分别培养，发酵液中的数量变化具有典型的微生 物生长曲线，但醋酸菌和酵母菌混合培养，二者的发酵液中的数量变化趋势无显著差异， 但其发酵液中的微生物数量高于红茶菌菌膜培养的数量，pH值高于红茶菌发酵液。 3红茶菌成膜及发酵液中的物质变化 红茶菌培养成膜与糖代谢密切相关。培养液糖含量是影响成膜的主要因素，添加适 当浓度酒精、酵母膏和蛋白胨能明显提高菌膜的生成量；培养液的表面积增大，有利于 膜的形成：仅以酒精作为碳源不成膜。培养液pH高低与膜生成量呈负相关。 红茶菌培养过程中，发酵液中的可溶性固形物含量变化基本呈直线下降趋势，pH值 在发酵前期急剧下降，中后期保持稳定。培养12d，发酵液中游离氨基酸总量从培养液的 70．49499／mL降到27．439 形成了培养液没有的氨基酸。 混合培养中，其发酸液中儿茶素的总量下降。但在酵母茵Y3、醋酸菌C64分别培养中， 发酵液中的EGC、EC含量大幅度增加，其他儿茶素含量都下降，而EcG降至培养液的 而DLC、EC含量增加。结果表明，酵母菌、醋酸菌具有降解酯型儿茶素的作用，乳酸 菌有改变儿茶素空间结构的作用。 4抗菌优势微生物的筛选 除去乙酸的醋酸菌发酵液，有促进指示菌生长的作用，选择出了促进作用较弱的C64 菌株。酵母菌、乳酸菌均具有一定的抑制指示菌的能力，醋酸菌C64和Y3混合培养抑菌 效果最强，选择出了具有较强抑菌能力的酵母菌Y3和乳酸菌LA和LP。因此，确定了抗 菌能力强的优势微生物粟酒裂殖酵母Y3、醋酸菌C64、乳酸菌LA和乳酸菌LP组合。 5发酵液蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳条件优化 对红茶菌发酵液蛋白质的分析方法进行了研究。结果表明，调节发酵液pn至6．0， 加入0．2％不溶性PVP，振荡20min，4000r／rain离心15rain，MD34透析袋透析3d， 冷冻浓缩获得的蛋白质电泳样品液；11％分离胶，5％浓缩胶电泳，能获得清晰的蛋白质 谱带。 6发酵液抗菌是酸性物质、抗菌蛋白、茶多酚等协同作用的结果 采用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌，分别对不同浓度的茶叶水浸出物，红 茶菌发酵液的pH值，发酵液的透析液，透析液分别经胰蛋白酶、过氧化氢酶、蛋白酶K 处理的样品液的抑菌效果进行了研究。1．o％(W／V)茶叶的水浸出物、红茶菌发酵液及发 酵液的透析液对指示菌均有抑菌效