纳豆激酶的发酵纯化条件的优化及开发应用.pdfVIP

纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用 摘要 2002年卫生部将纳豆作为普通食品进行管理，纳豆中的有效成分纳豆 然深受血粘稠患者的热捧，因此近年来NK产品研发已成为国内外研究的热 门课题。本课题以从中国普通微生物菌种保藏中心(ChinaGeneral Culture Collection Microbiological 纳豆芽孢杆菌(Bacillus 酵、提纯和应用等方面，主要研究内容包括以下5个方面。 (1)纳豆的制备及其质量检测。通过对精选黄豆进行清洗、浸泡、沥 水、蒸煮、冷却、接种、发酵、后熟等工艺制得纳豆，同时对其质量进行检 测。检测结果表明，纳豆呈淡黄色，具有纳豆特有的滋气味，粘性强、拉丝 合SB／T 10528．2009《纳豆》对纳豆指标的各项要求。 (2)NK固体发酵条件的研究。首先对影响NK活力的食盐加入量、 大豆初始含水量、大豆蒸煮时间、菌体接种量、发酵时间、发酵温度和后熟 时间等7个固体发酵条件进行了单因素实验，确定了每个因素的最佳值；其 次通过预备试验确定了影响NK活力的关键因素，即：大豆初始含水量，大 豆蒸煮时间，菌体接种量；并通过正交实验和验证实验，确定了最佳优化结 果，即大豆初始含水量为50％，大豆蒸煮时间45min，菌体接种量为10％。 (3)盐析法分离纯化NK的研究。采用硫酸铵作为盐析用盐，并绘制 盐析曲线，根据盐析曲线，选择30％的硫酸铵饱和度沉淀杂蛋白，选择70％ 的硫酸铵饱和度沉淀NK，得到盐析法分离纯化结果为：比活力达到508．1 IU／mg，纯化倍数为1．2l，回收率达到92％。 分子量为30KD的超滤膜，再将其透过液通过截留分子量为10KD的超滤膜， 收集中间分子量段的NK滤液；同时研究了操作压力、料液温度和料液pH 值等三个超滤工艺参数对膜通量和NK含量的影响，并通过单因素试验和正 交实验，得到了最佳优化结果，即操作压力为0．25Mpa，料液温度为37℃， 料液pH值为7．0。根据超滤工艺参数优化结果，得到超滤法分离纯化NK 结果为：比活力达到1052．4 IU／mg，纯化倍数为2．50，回收率达到81％，与 硫酸铵盐析法分离纯化NK相比较，虽回收率有所下降，但NK的纯化倍数 得到很大提高，且纯化步骤简单、纯化条件温和，减少了NK的损失。 (5)山楂速溶纳豆粉的研制。采用冷冻干燥法制备纳豆粉及纳豆激酶 楂粉、麦芽糊精、黄原胶等原辅料经过100目筛、混合、调配和包装等工艺 制得山楂速溶纳豆粉，在单因素实验的基础上，以感官评价为评分标准，采 用L9(34)正交实验和极差分析得到山楂速溶纳豆粉最佳配方及工艺条件为： 纳豆粉与山楂粉质量比为l：O．3，麦芽糊精添加量为20％，黄原胶添加量为 0．3％，冲调温度为60℃，此工艺条件下山楂果香浓郁、速溶性好且无分层 现象。 关键词：纳豆激酶，固体发酵，盐析法，超滤法，速溶性 Ⅱ THEOPTIMIZATION OF AND PURIFICATIoN ANDAPPLICATIoN oF NATTol(INASE ABSTRACT Nattoasan foodWas administeredofHealtIl ordinary Ministry in2002． by Nattokinaseastheactive innaRohasanexcellent of