魔芋甘露聚糖肽备技术研究.pdfVIP

f嘲嬲 ATIoNTECHNOLOGY STUDYONPREPAR and ofScience Shaanxi Technology University for of Fulfillmentofthe me inPartial Degree Requirement Masterof Engineering Shao ByJing-ke Gen-nianMao Thesis Professor Supervisor：Associate May,2014 魔芋甘露聚糖肽制备技术研究 摘要 的一种新型免疫增强剂。大量临床研究表明，甘露聚糖肽能减轻放疗化疗的 毒副作用，增强和调节患者的免疫功能，适用于免疫功能低下的各种疾病。 目前国内制备甘露聚糖肽主要是通过a-溶血链球33#菌株经深层培养发酵提 取而得。随着科研技术的进步，各种食源性多肽因其易吸收、无毒副作用、 安全性高等优势，已成为制备生物活性肽的重要来源。 我国是世界上魔芋种植量最大的国家，也是最大的魔芋生产国。目前我 国对魔芋的利用主要集中在魔芋精粉(葡甘露聚糖)，而魔芋精粉加工过程 中产生的魔芋飞粉大多以饲料或干燥剂低价出售。研究表明，魔芋飞粉中含 有丰富的甘露聚糖和蛋白质，是获得甘露聚糖肽的良好来源。 本文以魔芋飞粉为原料，通过发酵法和酶解法制备了魔芋多肽；并以酶 解法得到的魔芋多肽为实验材料，通过超滤分离，凝胶过滤色谱分离等方法 从中分离出魔芋甘露聚糖肽，得到了以下结果： 1．研究了魔芋多肽发酵法制备工艺，结果表明：以多肽得率为考察指 标，通过单因素实验和正交实验，得出最佳发酵工艺条件为：菌种比例(米 曲霉：枯草芽孢杆菌)1：2、接种量6mL、发酵时间40h、发酵温度34℃、 发酵基质pH8．0，在此工艺条件下魔芋多肽的最高得率为5．78％。 2．研究了魔芋多肽酶解法制备工艺。以水解度为考察指标，分别采用 碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶水解魔芋飞 粉，结果表明：酶解魔芋飞粉制备魔芋多肽的最佳用酶为碱性蛋白酶。 以魔芋多肽得率为考察指标，通过单因素实验和正交实验，确定出最佳 的酶解工艺条件为：料液比1：20、酶解温度50℃、酶解时间180min、酶解 环境的pH 8．O、加酶量3300U／g，在此工艺条件下魔芋多肽的最高得率为 8．72％。 3．采用超滤分离将魔芋多肽分离成了四个分子量区段，即区段I(M 300 KDa)、区段II(100 100KDa)和区段IV(M10 M100KDa区段的分子量范围与甘露聚糖肽标准品一致，初步判断其主 要为甘露聚糖肽。 采用Sephadex 段的甘露聚糖肽进行了进一步分离，得到了N1、N2和N3三个组分。研究 得出的最佳洗脱条件为：洗脱剂为蒸馏水，上样量为5mL，样品浓度为150 mL／min。 mg／mL，洗脱流速为O．8 组分的分子量范围为10I①a～20Kda。 将甘露聚糖肽标准品与Sephadex 氨基酸图谱进行比对得知：N2组分与甘露聚糖肽的相似度最高，测定得知 其中的甘露聚糖肽含量为O．307mg／mL。 G．100分离后的N2组分的化学组成进行