龙牙百合几丁质和β-1、3葡聚糖酶基因的遗传转化研究.pdfVIP

摘 要 针对尖孢镰刀菌的致病机理：菌丝阻塞维管束引起水分代谢失常 和菌丝在植物体内产生毒素(镰刀菌酸)损害膜结构造成代谢失常， 从而导致植物萎焉。本实验以龙牙百合为研究对象，应用细胞工程中 的离体培养方法并结合转基因技术，以期找到抗尖孢镰刀菌的有效途 径。 本研究包括两个主要内容：龙牙百合的组织培养和遗传转化。以 龙牙百合为材料，组培研究表明，鳞片叶是组培的适宜外植体。MS+2、 4-D 2rag／L+6-BA lmg／L+NAA 2mg／L为生根的最佳培养基。本试验已建立了适用于龙牙百合遗传转 化的快速高频再生系统。 用携带有几丁质酶基因和B．1、3葡聚糖酶基因的工程菌，通过 农杆菌介导法和基因枪转化法转化龙牙百合，经PCR和点杂交检测 证明外源基因已经整合到植物染色体中。同时对农杆菌介导法和基因 枪法进行比较，发现农杆菌介导法的转化率为16．7％，基因枪法的转 化率为50％，因此可能基因枪转化法更适于龙牙百合的遗传转化。 关键诩：龙牙百合 植株再生 遗传转化 农杆菌介导 基因枪PCR Southern点杂交 Abstract 2n withthe Fusarium caused terms of Oxysporumplant principle disease：bundleswereblockedandFusaridacid cellswasformed killing SOthatcausedwatermetabolismabnormaland byhyphae plant ordertofindouteffectivemethodofanti—Fusarium wiltirig．In YaLiHiumwastakenasmaterialwith tissue Oxysporum,Long plant in cultureand transformationthis genetic techniquespaper． wereconcludedin this Tv、,omaincontents paper：theplant and transformation．Someeffectivefactorswere regenerationgenetic in establisha studiedintissuecultureorderto quick，highfrequency Ira of transformationLillium regenerationsystemgenetic forLong Theresultsindicatedthatthescaleleafwasthebest appropriate combinationofMS+2．4一D the explant．The