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2．5转基因水稻植株中潮霉素抗性的检测…………………………………………22
2．6PCR分析………………………………………………………………………………………………．．22
2．6．1水稻植株叶片总DNA的提取：……………………………………………22
2．6．2
PCR扩增…………………………………………………………………………………………．23
2．7Rr-PCR分析…………………………………………………………………………………………。23
2．7．1去除RNA分离物中的基因组DNA………………………………………24
2．7．2RT—PCR……………………………………………………………………………………………．24
2．8水稻成熟种子中总蛋白Western
blot分析…………………………………一24
2．8．1总蛋白的提取………………………………………………………………．．24
2．8．2加样………………………………………………………………………………………………。25
2．8．3电泳…………………………………………………………………………………………………25
2．8．4电转移……………………………………………………………………………………………．26
2．8．5抗原抗体反应………………………………………………………………．26
2．8．5．1封闭…………………………………………………………………………………………．26
2．8．5．2抗体作用…………………………………………………………………．26
2．8．5．3显影…………………………………………………………………………………………．27
2．9肿瘤细胞凋亡实验……………………………………………………………。27
2．9．1细胞培养及技术……………………………………………………………27
2．9．2
WST法检测…………………………………………………………………．27
第三章结果与分析………………………………………………………………………28
3．1转基因水稻植株的获得…………………………………………………………．28
3．2转基因水稻植株的PCR鉴定……………………………………………………29
3．2．1
A号材料的PCR鉴定………………………………………………………．．29
3．2．2B号材料的PCR鉴定………………………………………………………．．30
3．3转基因植株中目的基因的表达分析…………………………………………．．3l
3．3．1
RT-PCR分析……………………………………………………………………………………．3l
3．3．1．1A号材料的RT．PCR分析………………………………………………31
3．3．1．2B号材料的RT-PCR分析………………………………………………31
3．3．2水稻成熟种子中总蛋白Westernblot分析………………………………．32
3．3．2．1A号材料的Westernblot分析…………………………………………32
3．3．2．2
B号材料的Westernblot分析…………………………………………33
3．3．2．3
C号和D号材料的Westernblot分析…………………………………34
3．4水稻中表达的IGFBP．3蛋白对肿瘤细胞凋亡率的影响……………………．35
第四章小结与讨论……………………………………………………………………．38
4．1小结………………………………………………………………………………………………………．38
4．2讨论………………………………………………………………………………………………………39
参考文献………………………………………………………………………………．．40
致谢……………………………………………………………………………………44
转基因水稻中表达胰岛素样生长因子
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