Anoxybacillus+sp+α-淀粉酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达.pdfVIP

Q一淀粉酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达 彳72咧施cf批sp 摘要 葡萄糖苷键，因此也被叫做1，4．0【．D．葡萄糖苷水解酶，它被广泛应用于发 酵、淀粉糖生产、造纸、纺织等行业，具有很大的经济价值。 本实验采用稀释分离的方法从云南腾冲温泉筛选出一株可水解淀粉的 嗜热细菌GXTC．3，该菌株革兰氏染色为阳性，细胞呈杆状，最适生长温度 基因，测序验证后加入酶切位点，然后与表达载体pHISl525连接转化大肠 l525．JH并提取质粒进一步转化巨大 杆DH50c，筛选出阳性转化子DH5a-pHIS 525．JH。经 芽孢杆菌YYl3m1原生质体，获得基因工程菌mml．pHISl SDS。PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达。重组酶经镍 柱等纯化后，酶学性质研究表明：该酶的最适温度与pH值分别为60℃与pH 7．O一10．5之间具有很好的稳定性，Km值为1．94 8．5，在pH m∥mL，酶活力可 1 达25 0【．淀粉酶可水解淀粉产生葡萄糖、麦芽糖和麦芽 明彳，zD砂6口cf批sp．GXTC．3 I 三糖的混合物，而对a环糊精和p环糊精基本不起作用。 巨大芽孢杆菌表达系统是一个较新颖的表达系统，比大肠杆菌等表达 系统具有很多的优势，本实验还初步优化了巨大芽孢杆菌YYl3m1工程菌的 培养条件，结果表明：该基因工程菌的最适碳源与氮源分别为果糖和酵母 膏，在表面活性剂吐温．80存在的条件下能较高的提高外源蛋白的表达产 量，在中性pH，37℃的条件下能较好的产酶。 关键词：筛选；彳，z咧施cf加；Q．淀粉酶；巨大芽孢杆菌；酶学性质；表达； 产酶条件 II 0【-AMⅥ，ASEGENEEXPI冱SSIONINB口cf肌岱 彳刀D砂易口cf砌s 聊馏哆纪以埘钾 ABSTRACT intemal starchassubstratecanbe舶m Alpha-锄ylase(EC3．2．1．1)with ofstarCh bond，soitisalsokno、Ⅳnasl， hydrolysis l， 4—0【-D-glucoside is usedinfermentation， 4一仅-D—glucosidehydrolysiseI屹)，IIle，whichwidely andotherindustries，haseconomic starch，sugarproduction，p印er，textile great value． Inthis the methoddilution行om hot study， s印aration 1bngchongsprings strain canbe starchselecteda bacteriumGXTC-3，me hydr01yzed thenllophilic