Kluyveromyces+marxianus+GX-15+ADH1基因的克隆、表达及重组蛋白酶学性质研究.pdfVIP

U入一1)A上肚1GX．15 l KZ铭W2阳朋W巴譬朋口麟Z口刀“SKZ研椰2阳朋w劣朋口麟勉刀“s ADHl基因i互篓妊目 的克隆、表达及重组蛋白酶学性质研究 摘要 马克思克鲁维酵母(脚2m彬yc甜聊口瓒缸，2淞)具有比其它真核生物更 高的生长速率，耐高温性能，以及能利用包括乳糖在内的更广底物范围等， 近年来引起人们的注意，被认为是乙醇发酵生产中的优良菌株。酵母乙醇 脱氢酶是催化乙醛生成乙醇步骤的关键酶，因此在乙醇发酵代谢中非常重 要。酿酒酵母和乳酸克鲁维酵母中乙醇脱氢酶已经有大量的研究，但是对 马克思克鲁维酵母乙醇脱氢酶的研究还很少，也还没有对马克思克鲁维酵 母乙醇脱氢酶异源表达的研究，对马克思克鲁维酵母乙醇脱氢酶生化性质 的研究，将有助于我们进一步认识马克思克鲁维酵母发酵产乙醇的机制。 以_池】，’坦阳所弦黜，，z口掰砌，2淞GX．15基因组总DNA为模板，通过PCR扩增 pET-ADHl，将重组质粒导入E∞，f 达20h，经SDS．PAGE电泳分析表明，重组蛋白大小约为57kDa，与预测的 结果一致。再经非变性PAGE电泳分析，重组蛋白的大小约为220kDa，预 测该蛋白为四聚体。通过酶活检测，该重组乙醇脱氢酶具有较高的活性， 其酶活性最适pH为7．O，最适温度为50℃。在最适pH和最适温度下，以乙 醇为底物，NAD+为辅酶时重组乙醇脱氢酶的Km值为68．8mM，最大反应速 min-1 度为48．6岬olm百1；以乙醛为底物，NADH为辅酶时，重组乙醇脱氢 min．1 酶的Km值为4．7州M，最大反应速度为80．3岬olm百1。 乙醇脱氢酶 发酵 酶活 关键词：Ⅺ叼鹏阳叼肜鲫历锨姗螂GX一15 ClOⅢG，EⅫRESSIONAND OF RECO卫曲n蛆NT ALCOHOL l OFK工UⅦROMVCES MARXIAM7SGX．15 AB STRACT K·朋口联砌，z淞has been interest recently duet0itS gaining some traits．which mclude t11efastest rate growtll of戤1y eul(a巧otic abil时ofbroader using subs仃atesetc．And V撕e妙of be廿1e was廿10u出to strain forutilizationiIl optimal ethanol alcohol production．Yeast thefinal