VEGF及ICAM-1在糖尿病大鼠内耳的表达及相关性研究.pdf

中文摘要 VEGF及lCAM-1在糖尿病大鼠内耳的表达及相关性研究 摘 要 目的：糖尿病内耳微血管病变是糖尿病慢性并发症之一，对糖尿病微 血管病变的发生发展机理研究形成多种学说，主要有非酶糖化学说、多元 kinase C，DAG-PKC system)学说及氧化应激等，目前尚未形成一致的看法。近 年来研究发现炎症反应过程的异常激活是糖尿病微血管损伤的主要机制， 从而引发糖尿病相关并发症的发生，在炎性反应过程中生成的炎性因子是 炎性损伤的关键因素，但其导致血管及组织损伤的机制还有待进一步的完 善。VEGF亦称血管通透因子(vascularpermeabilityfactor，VPF)， 000～45 是一组分子量在34 000的同源二聚体糖蛋白，是内皮细胞特异 性的丝裂原，具有强大的促血管通透能力和促血管生成效应。VEGF可能 通过与不同的受体结合，激活不同的信号传递系统而发挥其多样的生物 学功能。VEGF主要的生物学功能如促血管内皮细胞增生、迁移，促血管 生成和增加血管通透性作用。细胞间粘附分子一l(ICAM一1)是在细胞表面 表达的具有介导细胞间或细胞与细胞外基质相互作用的糖蛋白，它通过与 其受体结合，介导细胞间黏附，并相互传递信号，参与调控细胞功能，在 机体的胚胎发育，正常组织结构的维持，炎症与免疫应答，伤口修复，’凝 血与血栓形成，肿瘤的浸润与转移等多种病理生理过程中均有重要的作 用。在内耳的炎症反应及自身免疫反应过程中，在多种因子的刺激下细胞 胞并穿越血管壁游走到特定的炎性反应部位。故研究血管内皮生长因子 及相关性，有助于探讨糖尿病耳聋的发病机制，并为临床预防及延缓糖尿 病耳聋的发生提供理论依据。 方法：采用血管内皮细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子的免疫组 织化学检查及耳蜗毛细血管壁厚度的光镜观察，来分析VEGF及ICAM．1 在糖尿病内耳微血管病变中表达及其相关性。具体步骤如下：(1)动物的 选择及处理：选择白色雌性健康的wister大鼠48只(河北医科大学动物实 中文摘要 镜观察鼓膜完整。按原始体重由小至大编号后，随机分为两组，一组为对 照组(CG)以普通饲料喂养，二组为糖尿病组(DM)以高脂、高糖饲料喂养， 腹血糖16．65 mmol／L为造模成功。对照组大鼠一次性腹腔注射等体积 不含STZ的0．1mol／L柠檬酸缓冲液作为对照，以后以普通饲料喂养。以 造模成功开始计时，将糖尿病组大鼠随机分为糖尿病0周(DM0)、糖尿病 大鼠行全麻后取出耳蜗放入4％多聚甲醛中固定，4度冰箱保存备用。(2) 免疫组织化学实验：取每只老鼠的双耳于EDTA液中脱钙10天后，梯度酒 精脱水行石蜡包埋，超薄切片机切片后行免疫组化实验，具体步骤按照试 剂盒进行。(3)光镜观察。(4)数据统计分析。 结果： 1大鼠一般情况：对照组大鼠一般情况良好，活动自如，进食及饮水情况 无明显变化，体重持续增加；糖尿病组大鼠出现进食增加、饮水增加、 排泄增多、体重下降等典型的糖尿病表现。·经反复测试，对照组血糖均 稳定在正常范围，糖尿病组血糖有明显升高，说明造模成功。 2血管壁厚度的改变：对两组大鼠在各个时期的毛细血管壁厚度进行测 itm±0．022 量，结果以爱±S表示，正常组O周时血管壁厚度平均0．094 it itm±0．021 m，4周时平均为0．097 it itm±0．01itm， m，8周时平均为0．10 it u m±0．03 12周时平均为O．189 m，而糖尿病组血管壁明显增厚，糖尿病