普通烟草脯氨酸合成酶基因NtP5CS和Ntδ-OAT的克隆与表达分析.pdfVIP

摘要 烟草种植多分布在水利条件不好的山区或半山区，干旱是限制我国烟叶产量和品质进一步 提高的重要因子。研究烟草水分胁迫响应的相关基冈并进行克隆和表达分析，对揭示烟草的抗 旱分子机制和改良烟草的抗旱性具有重要意义。本研究从普通烟草中分离脯氨酸合成关键酶基 因的全长eDNA序列，分析该基冈的序列特征、进化关系和不同逆境胁迫诱导下的表达模式， 揭示其对胁迫诱导的应答机制，为利用该基冈改良普通烟草的抗逆境胁迫能力提供理论指导。 本论文主要包括以F两方面的内容： l、本研究利用已知基因同源片段设计简并引物获得P5CS基因中间片段，利用RACE技术 扩增其全长eDNA；采用生物信息学技术分析该基因的序列结构及其编码蛋白的保守域及基本 特性：利用RT-PCR研究其表达模式。从受干旱胁迫诱导的普通烟草品种中烟14中克隆到全长 为2584 2160 和氨基酸水平上高度同源。系统进化树分析显示，NtP5CS与番茄tomPR02基因可能是直系同 源基因。RT-PCR分析表明，干旱、低温、ABA、高盐等胁迫条件均可诱导脚5船基因的上调 表达，且在旺长期和胁迫条件下根和叶中表达量最高。首次从普通烟草中克隆得到PSCS基冈， 该基因对水分胁迫响应，可能参与普通烟草抗渗透胁迫反应。 2、 鸟氨酸转氨酶是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作 用。本研究根据其已知保守序列设计简并引物，从普通烟草品种中烟14中克隆到一条425bp 验证，首次从普通烟草中克隆到了鸟氨酸转氨酶基因，命名为膨．OA乃其GenBank登录号为 基冈的进化符合传统的生物学分类，主要功能域在生物进化中保守性较高。Real．timePCR分析 表明，肭口OAT基因受干旱、高盐、低温、ABA等多种胁迫处理的诱导表达，可能参与普通烟 草体内抗渗透胁迫过程。 关键词：普通烟草，NtPSCS，肭口OAT，克隆，表达分析 Abstract TobaccoiS iflmountainousorsemi-mountainousareaswithwater mainlyplanted shortage． and in thatlimitsthe oftobacco China．The isan factor Drought improvementyieldquality important of towaterstress andtheirclone is for response expressionssignificant studygenesrelating revealing molecularleveland the resistanceof the mechanismat improvingdrought tobacco． drought-defying In eDNA ofthe Was from this prolinesynthetasegene full—lengthsequencekey separated study,the tobacco(Nicotianatabacum)．The and sequencesignature，evolutionaryrelationshipexpression