利用多重RT-PCR检测水仙黄条病毒、水仙退化病毒和水仙花叶病毒.pdfVIP

福建农林大学学报（自然科学版） 第 4 4 卷 第 5 期 Journal of Fujian Agriculture and Forestry University (Natural Science Edition) 20 1 5 年 9 月 利用多重RT-PCR检测水仙黄条病毒、 水仙退化病毒和水仙花叶病毒 金 晶 12 ，付 翔 1 沈建国2 蔡 伟 2 梅 晨 2 高芳銮1 吴祖建1 (1.福建农林大学植物病毒研究所，福建福州350002;2.福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心 /福建省检验检疫技术研究重点实验室，福建福州350001) 摘要：根据水仙黄条病毒、水仙退化病毒和水仙花叶病毒外壳蛋白（CP)基因的保守区序列设计3对特异性引物，通过优化 包括Mg2+浓度、cDNA 浓度、Tag D NA 聚合酶浓度等在内的反应条件，建立了能同时检测这3种病毒的多重RT-PCR检测体 系，并与单一 RT-PCR做了比较.应用该体系能成功对3种病毒混合侵染的水仙样品进行多重RT-PCR扩增，获得751、623 和483 bP 3条与预期大小相符的特异性条带，且 RNA稀释至10“倍时仍能被检测到.建立的多重RT-PCR检测体系具有良 好的特异性和较高的灵敏度，比单一 RT-PCR扩增更加方便、快速. 关键词：水仙黄条病毒；水仙退化病毒；水仙花叶病毒；多重RT-PCR 中图分类号：S41-32 文献标识码 ：A 文章编号= 1671-5470(2015)05-062-06 D O I ： 10.13323/j .cnki.j .fafu ( nat.sci.) .2015.05.003 Simultaneous detection of Narcissus yellow stripe virus， Narcissus degeneration virus and Narcissus mosaic virus by multiplex RT-PCR JIN Jing 12, FU X iang 1, SHEN Jian -guo2, C AI W ei 2, M E I Chen2, GAO Fang-luan1，W U Zu -jia n 1 ( (.Institute of Plant Virology，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou，Fujian 350002，China ; 2 for Technology Research of Inspectionand Quarantine / Inspection Quarantine Technology Center of Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Fuzhou，Fujian 350001，China) Abstract ： To develop a multiplex RT-l^CR assay to detect single or mixed infections with Narcissus Narcissus degeneration virus (NDV) and Narcissus mosaic virus (N M V )，three compatible pairs of virus specific primers were de­ signed based on the conserved regions of the partial coat protein (CP) gene sequences of NYSV，NDV and NMV. The system of multiplex RT-l^CR was established ater optimizing the parameters including the co