WRK对枯草芽孢杆菌NX-2产出的γ-谷氨酰转肽酶的不可逆抑制动力学.pdfVIP

第24卷第 1期 高 校 化 学 工 程 学 报 No．1 、，0l24 2010 年 2月 JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversities Feb． 2O1O 文章编号：1003-9015(2010)01—0087-06 WRK对枯草芽孢杆菌NX-2产出的丫．谷氨酰转肽酶的不可逆抑制动力学 肖彦羚，周 治，姚 忠，宋希文，余维娜，刘步云，徐 虹，韦 萍 (南京工业大学 食品与轻工学院，江苏 南京 210009) 摘 要：7-谷氨酰转肽酶(GGT；EC2．3．2．2)催化的酰基转移反应可用于制备各种具有生理活性的谷氨酰化合物，对其 开展酶活力不可逆抑制动力学研究对于阐明GGT的作用机制具有重要意义。今以化学抑制剂 WoodwardS·ReagentK (WRK)与枯草芽孢杆菌NX-2产出的 GGT进行不可逆抑制反应，根据邹氏理论测得 WRK对GGT不可逆抑制反应的 微观速率常数 岛为O．03015S～，WRK与酶结合常数局为 1．352mmo1．L-。有抑制剂存在下GGT与供体Y．谷氨酰对硝 基苯胺的亲和力常数 =3．245mmo|L·一，GGT酰基化最大反应速度 =O．3771mmo1．(L．s)～。通过对 GGT的失活 动力学分析得到，失活反应级数为 l_3l3，说明在 GGT活性部位至少有一个谷氨酸(或天冬氨酸)残基参与催化反应。 关键词： 1，-谷氨酰转肽酶：不可逆抑制；动力学；WRK 中图分类号：Q555．3 文献标识码：A KineticofIrreversibleInactivationof7-Glutamyltranspeptidasefrom B．subtilisNX--2 byW oodward’sReagentK XIAO Yan-ling， ZHOUZhi， YAO Zhong， SONG Xi-wen， SHEWei—na, LIU Bu-yun， XU Hong， WEIPing (CollegeofLifeScienceandPharmacy,NanjingUniversityofTechnology,Nanjing210009，China) Abstract： y-Glutamyltranspeptidase(GGT；EC2_3．2．21Cna catalyzethecleavagecompoundsandthetrnasfer oftheiry-glutamylgroupstowaterorotheramino acidsna dpeptides．GGT cna beused in hteenzymatic synthesisofsomeglutamylcompoundswiht specialphysiological activities，naditsinhibitionisimportantfor the investigationofitscatal、rticmechanism．Thekinetichteory ofthe subs仃atereactionwith irreversible inhibitionofenzymeactivityproposedpreviouslybyTsouwasappliedforthestudyoftheinactivationofGGT, nadhteirreversibleinhibitorofWoodward’sReagentK (WRK)wasusedinthisstudytoreactwithGGTfrom B．subtilisNX．2．Asaresult．theirTeversibleinhibitionreactionrateofWRK toGGT’nadthecombination constantofWRK withenzymeweredeterminedas ki=0．03015s nad =1．352mmol-L～，respectivel