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农杆菌介导的p300-pa-8e基因转化马铃薯抗虫研究
目 录
中文摘要……………………………………………………………………………………………．．I
英文摘要……………………………………………………………………………………………．II
l j；I言………………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1研究目的和意义………………………………………………………………………………l
1．2文献综述………………………………………………………………………………………2
1．2．1马铃薯遗传转化研究进展………………………………………………………………。2
1．2．2马铃薯遗传转化的方法…………………………………………………………………。3
1．2-3地下害虫蛴螬的危害和防治………………………………………………………………9
·1．2．4苏云金芽胞杆菌cry8类基因的研究…………………………………………………。10
1．2．5转基因抗虫育种中存在的问题及发展策略……………………………………………14
1．2．6马铃薯抗虫基因工程研究进展…………………………………………………………20
1．2．7转基因植物的商业化生产………………………………………………………………20
2材料与方法………………………………………………………………………………………22
2．1材料与试剂…………………………………………………………………………………．22
2．1．1植物材料…………………………………………………………………………………22
2．1．2菌株与质粒………………………………………………………………………………22
2．1．3酶和试剂…………………………………………………………………………………23
2．1．4仪器设备…………………………………………………………………………………．23
2．1．5抗生素和激素……………………………………………………………………………24
2．2试验方法……………………………………………………………………………………．24
2．2．1农杆菌的活化与保存……………………………………………………………………24
2．2．2农杆菌介导转化马铃薯的方法…………………………………………………………．24
2．2．3马铃薯遗传转化影响因素探讨…………………………………………………………25
2．2．4再生植株的分子检测……………………………………………………………………26
l
2．2．5转基因植株的移栽………………………………………………………………………．3
2．2．6转基因植株的抗虫试验…………………………………………………………………31
3结果与分析……………………………………………………………………………………。33
3．1遗传转化体系影响因素探讨………………………………………………………………33
3．1．1薯块再生培养基的确定…………………………………………………………………33
3．1．2农杆菌工程菌液的浓度及侵染时间对遗传转化的影响………………………………34
3．1．3共培养时间对遗传转化的影响…………………………………………………………35
3．1．4脱菌抗生素种类及浓度对遗传转化的影响………………………………………：……36
3．1．5芽诱导阶段选择压的确定………………………………………………………………36
3．1．6生根阶段选择压力的确定………………………………………………………………36
东北农业大学农学硕士学位论文
3．2转基因植株的获得…………………………………………………………………………．37
3．3转基因植株的分子检测……………………………………………………………………．39
3．3．1转基因植株的PCR分析………………………………………………………………。39
3．3．2转基因植株的PCR。—Southem杂交……………………………………………………．39
3．3．3转基因植株的Southern杂交……………………………………………………………40
3．4网室移栽与转基因马铃薯的获得………
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