液相色谱-串联质谱法研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白（HV12p-rPA）的一级结构.pdfVIP

维普资讯 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2008，43(7)：737—742 ·737· 液相色谱-串联质谱法研究重组水蛭素 12肽与瑞替普酶 融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构 余 蓉 ，张贵锋 ，高 玲 ，苏志国 ，吴梧桐 (1．四川大学华西药学院 靶向药物及释药系统教育部重点实验室，四川 成都 610041； 2．中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室，北京 100080； 3．中国药科大学 生命科学与技术学院，江苏 南京210009) 摘要：利用液质联用研究重组水蛭素 12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p—rPA)的一级结构。采用基质辅助激光 解析电离飞行时间质谱 (MALDI—TOF—MS)测定水蛭素 12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p—rPA)的相对分子质量；采 用液质联用分别分析HV12p—rPA的胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶 (chymotrypsin)酶解产物。MALDI—TOF—MS测 得 HV12p—rPA的相对分子质量为41472Da，与理论值相符；HV12p—rPA的胰蛋白酶 (trypsin)酶解产物进行液质联用 分析结果表明该融合蛋白中含有瑞替普酶序列；HV12p．rPA的胰凝乳蛋 白酶 (chymotrypsin)酶解产物进行液质联用 分析，结果表明融合蛋白中含有水蛭素 12肽，并检测出融合蛋白中的链接肽 (DEGGGSY)，融合蛋白的N末端 MASDF和 C末端 LDWIRDNMRP；采用液质联用进行肽图分析，识别出的多肽匹配度 Xcorr均超过 1．5，部分多肽的 Xcorr超过3．0，表明本实验测定过程中多肽识别结果准确可靠 ；目标蛋白的氨基酸序列覆盖率超过85％。结果确定 了HV12p—rPA融合蛋白的序列与理论值相符。 关键词：高效液相色谱质谱联用；水蛭素 12肽与瑞替普酶融合蛋白；相对分子质量；氨基酸序列 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0513—4870(2008)07—0737—06 Primarystructuredetermination ofhirudin andreteplasefusionprotein byLC／ESI-M S／M S spectrometry YU Rong， ，ZHANG Gui—feng ，GAOLing ，SUZhi—guo ，WU Wu—tong (J．KeyLaboratoryofDrugTargetingandDrugDeliverySystemofEducationMinistry，WestChinaSchoolofPharrno~y， SichuanUniversity，Cheugdu610041，China ；2．StateKeyLaboratoryofBiochemicalEngineering， InstituteofProcessEngineering，ChineseAcademyofSciences，Beijing100080，China ； 3．SchoolofLfieScienceand Technology，China PharmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China) Abstract：Theaim iStodeterminetheprimarystructureofanew hirudinandreteplasefusionprotein (HVl2p—rPA)byLC—ESI—MS／MSspectrometry．Themolecularweightofthehirudinandreteplasefusion protein (HV12p—rPA)wasmeasuredbymatrix—assisted laser