激活标记——一种有效的基因功能鉴定技术.pdfVIP

维普资讯 植物生理学通讯 第44卷 第2期，2008年4月 357 激活标记—— 一种有效的基因功能鉴定技术 邓伟，杨迎伍，胡楠，吴玉，李正国 重庆大学生物工程学院基因工程研究中心，重庆市高校功能基因及调控技术重点实验室，重庆400044 ActivationTagging- AToolforIdentificationofGeneFunction DENG Wei，YANG Ying-Wu，HU Nan，WU Yu，LIZheng-Guo KeyLaboratoryofFunctionalGeneandRegulationTechnologiesunderChongqingMunicipalEducationCommission，Genetic EngineeringResearchCenter,BioengineeringCollege,ChongqingUniversity,Chongging400044,China 提要：激活标记技术是植物基因克隆与基因功能鉴定的一种重要的方法。已经在拟南芥、矮牵牛、杨树、番茄和水稻等 多种植物中应用，并成功分离鉴定了一系列的功能基因。文章介绍了用激活标记方法克隆鉴定多个与植物生长发育相关 的功能基因技术。 关键词：激活标记；突变体；基因；克隆 随着拟南芥、水稻、杨树等植物基因组计划 (5)采用质粒拯救或TAIL．PCR等方法可以很方便 的完成，植物功能基因的研究变得 日益重要而且 地克隆到相应基因。通常采用的激活标记载体是 紧迫。目前基因功能研究常通过T．DNA或转座子 pSK1015和pSK1074载体(图1)。这2个载体都是 插入获得功能缺失(1oss．of-function)突变体，根据 在T．DNA左右臂之中含有连续4个35S增强子序 插入标记来分离突变基因并鉴定其功能。但对于 列，只是在筛选标记上有差别，前者用除草剂筛 存在着基因功能冗余(funcfionflredundancy)现象的 选，后者用卡那霉素筛选。由于不同植物对筛选 基因家族或者对于那些植物生存所必需的基因， 剂的敏感性不同，所以可以根据植物种类来选择 功能缺失突变往往很难进行研究。此外，对于由 合适的激活标记载体。除T．DNA插入方式 以外， 数量性状位点(quantitativetraitloci，QTL)控制的性 将增强子或启动子序列构建到玉米转座子元件Ds 状，无法用单基因的缺失来获得突变体，在这种 上，通过转座酶作用将增强子序列随机插入到植 情况下，功能获得(gain．of-function)突变就显得至 物基因组上，增强子或启动子会激活临近基因表 关重要。激活标记(activationtagging)是构建功能 达从而获得突变体(Wilson等 1996；Qu等2008； 获得突变体库的有效方法。由于CaMV35S启动 Ayliffe等2007)。到 目前为止，激活标记已经在 子的增强子效应(Odell等 1985；Zheng等2007)， 拟南芥、小麦等多种植物中应用，并且成功鉴定 将多个拷贝的增强子序列构建到T．DNA载体后， 了一系列功能基因。 含有多拷贝增强子序列的T．DNA插入到植物基因 1激素生物合成与信号转导相关蛋白基因的克隆 组中，增强子会激活邻近上下游基因的表达 ，这 和鉴定 样就可产生激活标记突变(Weigel等2000)。与其 植物中生长素的主要存在形式是吲哚乙酸 他方法相比，激活标记技术有以下优点：(1)含有 (IAA)，IAA的生物合成包括色氨酸依赖和色氨酸 增强子(enhnacer)的T-DNA可引起插入位点上游或 非依赖2条途径(Bartel1997)。人们通过插入突变 下游基因的超表达，从而得到功能获得突变体； 进行了大量的生长素缺陷突变体筛选工作，但是 (2)基因家族中某个基因超表达所引起的突变不影 响该家族中其他基因的功能；(3)由于这种突变体 收稿 2007．11．30 修定 2008．