猪基源的肝素粗品及混淆品的AS-PCR及ARMS分子检测.pdfVIP

维普资讯 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2008，43(5)：535—541 ·535 · 猪基源 的肝素粗 品及混淆 品的AS-PCR及 ARMS分子检测 于智勇 ，丁 鸽 ，丁小余 ，褚必海 ，钱 亮 ，顾 笋 (1．南京师范大学 生命科学学 院，江苏 南京 210046；2．扬州教育学院，江苏 扬州 225009) 摘要 ：本文建立了一种简便 、准确 的鉴别猪基源的肝素粗品及其混淆 品的DNA分子鉴定方法 。在对家猪 、野猪 及其他 7种动物 (均用于加工猪肝素粗品的混淆品)的mtDNAD—loop区进行序列分析的基础上 ，设计 了专 门用于鉴 别猪基源肝素钠 的AS—PCR(allele—specificPCR)引物及 ARMS(amplificationrefractorymutationsystem)引物 ，对家猪、 野猪及其他 7种动物来源 的肝素 、肌 肉或血液共 49个样 品的基源进行 了分子检测。结果表明：AS—PCR及 ARMS方 法均可用于猪基源肝素粗品的快速鉴别 。AS·PCR鉴别时的复性温度为 54～56℃，ARMS引物鉴别时 的复性温度更 宽，为 52～58℃。在用两种引物对肝素样品进行鉴别时 ，仅猪来源的肝素 DNA模板能扩增得到约 170bp的扩增条 带 ，而其他动物来源 的肝素 DNA模板在同样条件下无扩增产物 。 关键词 ：猪基源肝素钠 ；mtDNAD—loop区；AS—PCR；ARMS；分子鉴别 中图分类号 ：R9l5．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：05l3—4870(2008)05—0535—07 M olecularidentification ofheparinfrom pigsbyallele-specificPCR (AS-PCR)andamplificationrefractorymutationsystem (ARMS) YU Zhi—yong一，DING Ge ，DING Xiao—yuh ， CHUBi—hai，QIANLiang，GUSun (J．CollegeofLifeSciences，Na ngNormalUniversity，Na彬ng210046，China； 2．YangzhouCollegeofEducation，Yangzhou225009，China) Abstract：Theaim ofthisstudyiSto develop aconvenientand effectivemethod forthe identification ofheparinfrompigs(includeSusscrofadomesticaBrissonandSusscrofariukiuanus)．Basedonsequences ofD-loop region ofpigsand theotheranimals，two pairsofhighly specificprimerswere designed ofr distinguishingheparinofpigsrfom otheranimals．Theprimerswereemployed toamplifyD—loop region of DNA templatesextractedrfom pigandsevenotheranimalspeciesthatamounted to49 samples．AS-PCR (allele—specificPCR)andARMS (amplificationrefractorymutationsystem)wereallsuitableofrfast identificationofheparinrfom pigwithannealtemperatureat54—56 ℃ inAS-PCR andwithwideranneal temperatureinARMS．at52—58℃