猪白细胞介素18成熟蛋白基因克隆及在不同原核表达系统中的表达.pdfVIP

维普资讯 第29卷 第3期 华南农业大学学报 Vo1．29，No．3 2008年7月 JournalofSouthChinaAgricultural University Ju1．20o8 猪 白细胞介素 18成熟蛋白基因克隆及 在不同原核表达系统中的表达 郑兰兰 ，崔保安 ，陈红英 ，贾云飞 ，陈瑞亮 ，方忠意 (1河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州450002；2河南省动物性食品安全重点实验室，河南郑州450002) 摘要：RT—PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素 18成熟蛋白基因的cDNA，克隆到pGEM—T载 体，构建重组质粒pGEM—TpiLl8，转化E．coliJM109感受态细胞，取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测 定．测序结果表明，plL一18成熟蛋 白基因核苷酸长度为474bp，编码 157个氨基酸．将其分别克隆到表达载体 pQE30、pET一28a、pGEX6P一1中，构建重组表达质粒 pQE—mplL18、pET—mplL18、pGEX—mplL18．用 IPTG诱导表达，重 组菌菌体裂解物SDS—PAGE可检测到相对分子质量分别为 19000、21000、45000的重组蛋白．经薄层扫描分析， pQE—mplL18、pET—mplL18、pGEX．mplL18菌体裂解物分别占菌体总蛋白的17％、28％、27％，均 以包涵体形式存在． 关键词：猪 白细胞介素 18；成熟蛋白；原核表达 中图分类号：$831 文献标识码：A 文章编号：1001—411X(2008)03—0075—05 CloningofProcineInterleukin-18M atureGeneandIts ExpressioninDifferentProkaryoticExpressionVectors ZHENG Lan—lan ，CUIBao—an．．，CHEN Hong—ying ， JIA Yun．fei，CHEN Rui—liang，FANGZhong—yi’ (1CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary，He’nnaAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China； 2Henna An imalFoodSafetyKeyLabrotorary，Zhengzhou450002，China) Abstract：Porcine interleukin一18matureproteingenewasamplifiedfrom porcinespleencellsbyRT— PCR．PCR productwasclonedintotheTvectorpGEM—Tforsequencing．Theresultshowedhtathtenu— cleotidesequenceofthisgenewas474bp，which encodes157aminoacids．Itwassubclonedintothe prokaryoticexpressingplasmidvectorspQE30，pET一28a，pGEX6P一1，andtransformedintohostE．coli strainJM109orBL21ofrexpression．TheexpressionofpIL一18matureproteingenewasidentifiedby SDS—PAGE．Th eresultrevealedhtathteexpressionproductswerefusionproteinwiht relativemolecular massof19000，21000，45