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Microscope／Raman訓練課程講義 儀器管理人員：趙玉正 訓練日期：九十四年一月 目錄： 壹、儀器原理及基本構造之介照 貳、大樣品室及顯微鏡基本操作及注意事項 參、圖譜自動搜尋及建立新圖譜之軟體操作 肆、顯微鏡樣品mapping及confocal之操作說明 基本原理： 大樣品室及顯微鏡基本操作及注意事項 一.在開機收集圖譜前需檢查與確認下列事項： 確認機台的各部分電源已開啓：主機台、雷射、顯微鏡、照明及電腦。(注意：先不要移動Joystick) 執行電腦中之『OMNIC For Nicolet Almega』。 (須等待數分鐘) 二.進入軟體，到Collect之『Experiment Setup』 三.樣品測試：收集樣品的幾個主要步驟 (一)選擇或設定實驗方法。(如果做顯微鏡部分，須進入『Atlus』 -＞『show Atlus window 』在螢幕上將樣品影像打開) (二)將樣品放置在平台，對準所欲量測的點並對焦。 (三)收集背景(如果須要的話)：Collect Background。 (四)收集樣品圖譜：Collect Sample。 四.注意事項： (一)Exposure time：曝光時間，即快門(shutter)打開時間。 (二)Exposure次數：曝光次數 曝光時間及次數主要在降低雜訊比，通常，一秒曝光四次，相當於四秒曝光一次，主要在於不要讓CCD飽和，故強拉曼散射之樣品建議以曝光時間短及曝光次數多來收集，反之弱拉曼散射的樣品建議以曝光時間長曝光次數少進行收集。 (三)Aperture：光圏的大小，低散射之樣品建議取較大的光圏及大倍率之接物鏡。 (四)以顯微鏡進行實驗時，選pinhole；而以大樣品室時則選取slit。 (五)Resolution(解析度)：其值的高或低，在選取低解析度時，一次曝光所能量測到的範圍較大，如下圖： 圖譜自動搜尋及建立新圖譜之軟體操作 一、圖譜自動搜尋： 進入『Analyze』-＞『Library Setup』-＞『Search Libraries』 將軟體上目前有的所有圖庫加(Add)到右邊框框內。 按『Search Results』，點選”configure search results”，設定搜尋後一次要秀出多少圖譜。 按『Search Regions』，點選以全圖譜進行搜尋或輸入所欲搜尋之範圍值(可用滑鼠拉動兩邊的線 ,灰色區域即所欲搜尋的區域)。 進入『Analyze』-＞『Search』，便可得搜尋結果。 　 二、建立新圖譜： （一）進入『Analyze』-＞『Library Manger』-＞『Search Libraries』 -＞『Create』，輸入所欲新增圖庫之檔名（例如test），按下一步。 （二）輸入對此圖庫之註解及你的名字(可以全部空白) ，按下一步。 （三）一般而言,此頁可空白，直接按下一步。 （四）選取圖庫之光譜範圍，按下一步。 依實驗與應用的需求設定圖庫的解析度，一般設定在4㎝-1 ，按下一步。 一般而言,此頁勿需勾選任何項目，直接按完成。 將標準圖譜加到新的視窗，進入『Analyze』-＞『Add to Library』，選取所欲加入之圖庫（例如test），點選『OK』，輸入物種名稱，然後點選『OK』，即將圖譜加入所選取之圖庫中。 三、標準圖譜之搜尋： （一）進入『Analyze』-＞『Library Manger』-＞『Search Libraries』 -＞『Search for Text』。 （二）點”All libraries“項目，再輸入欲搜尋之物種名稱，按『Search』 即可完成所建立圖庫中標準圖譜之搜尋。 圖譜自動搜尋及建立新圖譜之軟體操作 一、圖譜自動搜尋： 進入『Analyze』-＞『Library Setup』-＞『Search Libraries』 將軟體上目前有的所有圖庫加(Add)到右邊框框內。 按『Search Results』，點選”configure search results”，設定搜尋後一次要秀出多少圖譜。 按『Search Regions』，點選以全圖譜進行搜尋或輸入所欲搜尋之範圍值(可用滑鼠拉動兩邊的線 ,灰色區域即所欲搜尋的區域)。 進入『Analyz