骨髓基质干细胞诱导分化为胰岛细胞的实验的研究.pdf

骨髓基质干细胞诱导分化为胰岛细胞的实验研究 摘 要 目的：胰岛细胞移植是治疗I型糖尿病最有希望的方法，由于供体细胞不足和免疫 排斥反应等问题，限制了胰岛细胞移植技术的应用。骨髓基质干细胞(BMSCs)具 有获得容易，可体外复制和增殖，可以定向诱导分化为特定功能细胞的特征。因此， 将BMSCs移植用于治疗糖尿病具有重要的临床应用价值。目前，尚未获得诱导干 细胞向胰岛细胞分化的高效诱导方法；取得较好治疗效果的干细胞移植途径尚未确 定。本实验主要探索体外诱导BMSCs分化为胰岛素分泌细胞的最佳条件；比较尾 静脉、肾被膜和胰腺内注射三种干细胞移植途径对糖尿病模型动物的治疗作用，以 筛选出干细胞治疗糖尿病的最佳移植途径。 方法：全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs。体外扩增后，部分细胞用于体外诱导实验， 即向培养体系中添加胰腺提取液、尼克酰胺、Exendin．4及不同浓度的葡萄糖；观察 分化细胞的形态变化；双硫腙染色法(DTZ)鉴定胰岛素分化细胞的生成；放射免 疫法(R认)检测上清液中胰岛素和C_一肽水平。另一部分细胞进行BrdU标记。将 标记的BMSCs，经尾静脉、肾被膜和胰腺内注射三种途径，移植入链脲佐菌素(STZ) 制备糖尿病模型小鼠体内。于移植后3、7、14、28、4